精氨酸支原体肉汤培养基的核心原理和使用方法及适用范围！

 

精氨酸支原体肉汤培养基是专门用于支原体（尤其是依赖精氨酸代谢的支原体）分离、培养和增殖的液体培养基。支原体是一类无细胞壁、结构简单的原核微生物，营养需求苛刻，需在富含血清、氨基酸等成分的培养基中生长，而精氨酸支原体的生长尤其依赖精氨酸作为能量和代谢底物。

 

一、培养基的核心原理

 

支原体无法合成自身所需的全部营养物质，其生长依赖外界提供的氨基酸、维生素、脂质（如血清中的成分）等。精氨酸支原体肉汤培养基的设计基于以下核心原理：

 

1、营养供给

 

基础成分（如牛肉浸粉、蛋白胨）提供氮源、维生素和矿物质，满足支原体基础代谢需求。

 

血清（通常为马血清或小牛血清）提供脂质、胆固醇和生长因子，支原体的细胞膜合成依赖这些成分（因支原体无细胞壁，细胞膜是其结构核心）。

 

2、精氨酸的关键作用

 

精氨酸是精氨酸支原体的核心能量来源：这类支原体可通过精氨酸脱氢酶分解精氨酸，产生 ATP（能量）和氨（NH），支撑其生长繁殖。

 

培养基中添加精氨酸可特异性促进该类支原体增殖，同时抑制不依赖精氨酸的微生物（一定程度上提高选择性）。

 

3、pH 缓冲与指示

 

培养基通常含酚红作为 pH 指示剂：精氨酸分解产生氨会使培养基 pH 升高，酚红由红色变为粉红色或紫红色，可通过颜色变化判断支原体是否生长（无需显微镜观察，直观便捷）。

 

二、培养基的主要成分（典型配方）

 

 

注：部分配方可能添加青霉素（抑制细菌，因支原体对青霉素不敏感），进一步提高选择性。

 

三、使用方法（完整流程）

 

1、培养基准备（若为干粉，需先配制）

 

溶解与灭菌：按配方称取干粉，加入去离子水搅拌溶解；分装至试管（每管 5-10mL），121高压灭菌 15 分钟（血清需灭菌后无菌添加，避免高温破坏成分）。

 

添加血清和抗生素：灭菌后冷却至 50左右，无菌操作加入过滤除菌的血清（终浓度 10-20%）和青霉素（若需，终浓度 100-200U/mL），混匀。

 

调 pH：灭菌后若 pH 偏离 7.2-7.4（支原体最适 pH），可无菌滴加无菌盐酸或氢氧化钠调节。

 

2、样本接种

 

样本类型：适用于临床样本（如呼吸道分泌物、尿道分泌物、组织匀浆）或支原体纯培养物的传代。

 

接种量：取 0.1-0.5mL 样本（或菌液），无菌操作加入培养基试管中，轻轻混匀。

 

阴性对照：同时设置未接种的空白培养基试管，排除污染或自身 pH 变化干扰。

 

3、培养与观察

 

培养条件：35-37恒温培养（需有氧环境，无需 CO培养箱），培养时间通常为 2-7 天（支原体生长较慢，需耐心观察）。

 

生长判断：

 

若支原体生长，精氨酸分解产生氨，培养基 pH 升高，酚红由红色变为粉红色或紫红色（颜色变化越明显，生长越旺盛）。

 

若 7 天后仍无颜色变化，且无浑浊（支原体生长一般不导致培养基浑浊，因数量较少），可判断为阴性。

 

4、后续操作（若阳性）

 

传代与纯化：取阳性培养物 0.1-0.2mL，接种至新鲜精氨酸支原体肉汤培养基或固体培养基（形成菌落），进一步纯化。

 

鉴定：结合固体培养基上的菌落形态（“煎蛋状” 菌落）、生化试验或 PCR 检测，确认是否为目标支原体。

 

四、注意事项

 

无菌操作：支原体对污染敏感（细菌、真菌易快速繁殖抑制支原体），所有步骤需在超净工作台中进行，避免污染。

 

血清质量：血清需无支原体污染（选择正规厂商），否则会导致假阳性。

 

颜色变化的特异性：若培养基浑浊且变色，可能是细菌污染（需结合固体培养基菌落形态排除）；纯支原体生长通常不浑浊，仅颜色变化。

 

保存条件：配制好的培养基 4冷藏保存，1 周内使用；避免反复冻融，否则血清成分易破坏。

 

五、适用范围

 

主要用于精氨酸依赖型支原体（如肺炎支原体、人型支原体等部分菌株）的分离培养和生长检测，广泛应用于临床微生物检验（如呼吸道感染、泌尿生殖道感染的病原学诊断）和实验室支原体研究。

 

通过以上原理和方法，可高效利用精氨酸支原体肉汤培养基完成支原体的培养与初步鉴定，其核心优势在于通过精氨酸选择性和 pH 指示，实现直观、特异性的生长检测。

 

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