实验培养空肠弯曲菌时，如何保证培养基的营养充足？

 

培养空肠弯曲菌时，培养基的营养充足是其生长繁殖的基础（空肠弯曲菌为营养要求较高的致病菌，需特定氨基酸、维生素和生长因子）。保证营养充足需从培养基配方设计、制备过程控制、使用前检查三个环节入手，具体方法如下：

 

一、选择适配的培养基配方，确保核心营养成分完整

 

空肠弯曲菌的营养需求包括：氮源（氨基酸、多肽）、碳源（葡萄糖等）、维生素（B 族为主）、生长因子、矿物质。需选择针对其设计的专用培养基，核心成分需覆盖以下营养：

 

关键营养需求   对应培养基成分    作用说明

 

氮源（核心需求） 胰蛋白胨、大豆蛋白胨 提供氨基酸、多肽等，满足细菌蛋白质合成需求（空肠弯曲菌无法自主合成多种氨基酸）

 

维生素与生长因子 酵母提取物 提供 B 族维生素（如叶酸、核黄素）、生物素等，促进代谢酶合成（酵母提取物是关键营养补充）

 

碳源与能量 葡萄糖、乳糖（少量） 提供能量代谢底物（空肠弯曲菌对碳源需求较低，过量可能抑制生长，故配方中通常≤1g/L）

 

渗透压平衡 氯化钠 维持细胞渗透压，避免细菌因吸水/失水死亡

 

特殊生长因子 血液或血清（可选） 部分培养基添加羊血/马血，提供血红素、辅酶等，增强营养支持（尤其对营养缺陷株）

 

注意：避免自行调整配方（如随意增减营养成分），建议使用商品化成品培养基或严格按标准配方配制，确保营养比例适配。

 

二、规范培养基制备流程，减少营养成分损耗

 

培养基的灭菌、溶解、添加物处理等步骤若操作不当，会导致营养成分破坏（如高温破坏维生素、抗生素失效），需严格控制：

 

1、基础成分溶解时避免过度加热

 

胰蛋白胨、酵母提取物等热敏性成分需用温水（50-60）搅拌溶解，避免煮沸时间过长（高温会破坏氨基酸和维生素）；

 

琼脂需加热煮沸至完全溶解，但溶解后需立即降温（可置于 50-55水浴保温），减少营养成分氧化。

 

2、灭菌条件温和，避免高压时间过长

 

基础培养基通常采用121高压灭菌 15 分钟（而非 20 分钟以上），缩短高温暴露时间，减少酵母提取物中的维生素、蛋白胨中的氨基酸被破坏；

 

若灭菌后发现培养基颜色变深（棕褐色），可能是高温导致营养成分碳化，需废弃重新制备。

 

3、选择性添加物（抗生素、血清）需无菌低温添加

 

抗生素、血清等成分对高温敏感，需在培养基灭菌后冷却至 50-55时无菌加入（温度过高会破坏抗生素结构和血清中的活性成分）；

 

添加时需轻轻摇匀，避免局部浓度过高抑制目标菌。

 

4、pH 值调节至最适范围

 

空肠弯曲菌最适 pH 为 7.2±0.2，制备时需用盐酸或氢氧化钠调节 pH：

 

pH 过低（<6.5）会导致氨基酸变性，影响氮源利用；

 

pH 过高（>8.0）会破坏维生素稳定性，且抑制细菌代谢酶活性。

 

调节后需再次核对 pH（灭菌后 pH 会略有下降，可提前调至 7.3-7.4）。

 

三、控制培养基储存条件，防止营养流失

 

制备好的培养基若储存不当，会因脱水、污染、氧化等导致营养失效，需注意：

 

1、储存温度与时间

 

固体培养基倒平板后，需在4±2冰箱避光储存（避免光照破坏维生素），保质期通常为 1-2 周（商品化培养基按说明书执行）；

 

未倒平板的液体培养基（如增菌用）需密封后 4储存，避免水分蒸发和杂菌污染，储存不超过 1 周。

 

2、储存前检查外观

 

倒好的平板需表面平整、无水滴（若有冷凝水，需倒置存放，避免水滴冲刷培养基表面营养）；

 

观察是否有污染（如霉斑、浑浊）、脱水（边缘干裂、表面发白），若出现上述情况，营养已受破坏，需丢弃。

 

3、使用前预处理

 

从冰箱取出的培养基需在室温放置 30 分钟（避免低温刺激细菌），或在 37水浴中预热至接近体温（但温度不超过 40，防止营养成分变性）；

 

若平板表面干燥，可在超净台内打开皿盖通风 10-15 分钟（仅去除表面水汽，避免过度干燥导致营养流失）。

 

四、结合样品前处理，避免营养竞争或抑制

 

若样品中杂菌过多（如肉类、粪便样本），杂菌会与空肠弯曲菌争夺营养，导致目标菌生长受抑，需通过前处理减少竞争：

 

1、先增菌培养，提高目标菌数量

 

对低浓度样品（如可疑水源），先接种至增菌培养基，在微需氧环境下 37培养 24 小时，利用增菌液中的营养（如酵母提取物、蛋白胨）让空肠弯曲菌大量繁殖，再转接至固体培养基，减少杂菌竞争压力。

 

2、选择性抑制杂菌，减少营养消耗

 

固体培养基中已添加丙酸、抗生素等抑制剂（如 TOS 培养基的丙酸钙抑制大肠杆菌），使用时确保抑制剂浓度合格（商品化培养基无需调整，自配需严格按比例添加），避免杂菌过度生长消耗营养。

 

五、总结

 

保证空肠弯曲菌培养基营养充足的核心逻辑是：“选对配方 + 规范制备 + 正确储存 + 减少竞争”。其营养需求虽特殊，但通过使用专用培养基、控制灭菌和储存条件、配合样品前处理，即可为其提供稳定的营养环境。相比之下，后续的培养条件（微需氧、42温度）同样关键 —— 即使营养充足，若环境不适（如氧气过高），细菌仍无法生长，需协同控制。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！