真菌培养基的工作原理与使用方法及具体制备流程！

 

真菌培养基是用于分离、培养、鉴定真菌的营养基质，其设计核心是模拟真菌自然生长环境，提供必要的营养物质和适宜的理化条件。以下从原理和使用方法两方面详细说明：

 

一、真菌培养基的原理

 

真菌作为真核异养生物，无法自身合成有机物，需依赖外界环境获取营养并在适宜条件下生长繁殖。真菌培养基的设计原理围绕其代谢需求和环境适应特点展开，具体包括以下核心要素：

 

1、营养物质供给

 

真菌生长需满足碳源、氮源、无机盐、生长因子四大类营养需求：

 

碳源：真菌能量和生物合成的核心原料，常见如葡萄糖、蔗糖（速效碳源）、淀粉、纤维素（部分真菌可利用复杂碳源，如木霉能分解纤维素）。例如，酵母菌偏好葡萄糖，霉菌对蔗糖利用率较高。

 

氮源：用于合成蛋白质、核酸等，以有机氮为主（如蛋白胨、酵母膏），部分真菌可利用无机氮。例如，致病性真菌常用蛋白胨作为氮源，更接近宿主环境。

 

无机盐：参与酶活性调节、渗透压维持，如钾（KCl）、镁（MgSO）、铁（FeSO）等。例如，硫酸镁可促进真菌细胞壁合成。

 

生长因子：多数真菌需维生素（如 B 族维生素）、氨基酸等，通常由酵母膏、麦芽汁等天然成分提供（无需单独添加）。

 

2、理化条件适配

 

真菌对环境的要求与细菌差异显著，培养基需优化以下参数：

 

pH 值：真菌偏好酸性环境（pH 4.0-6.0），例如霉菌最适 pH 4.5-5.5，酵母菌 pH 5.0-6.0。若 pH 偏碱，会抑制菌丝生长。

 

渗透压：部分真菌（如酵母菌、高渗环境真菌）需较高渗透压，培养基中添加蔗糖（20%-40%）可满足需求（如高渗 PDA 用于耐旱真菌）。

 

透气性：多数真菌为好氧菌，固体培养基的多孔结构或液体培养基的摇床培养可保证氧气供应。

 

二、真菌培养基的使用方法

 

以最常用的固体培养基为例，步骤如下：

 

1、培养基选择

 

根据目标真菌类型选择配方：

 

通用型：PDA（马铃薯葡萄糖琼脂），适合多数霉菌（如青霉、曲霉）、酵母菌。

 

致病性真菌：Sabouraud 培养基（含葡萄糖、蛋白胨，pH 5.6），抑制细菌污染（酸性环境）。

 

特殊需求：察氏培养基（合成培养基，用于真菌分类，成分明确：磷酸二氢钾、硫酸镁等）。

 

2、制备流程

 

以 PDA（配方：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 15-20g、水 1000mL）为例：

 

步骤 1：处理碳源原料

 

马铃薯去皮切块（2cm 见方），加水 1000mL 煮沸 30 分钟（至软烂），用纱布过滤取滤液（补足水分至 1000mL）。

 

步骤 2：溶解与混合

 

滤液中加入葡萄糖和琼脂，加热搅拌至完全溶解（琼脂需煮沸溶解）。

 

步骤 3：调节 pH

 

用 1mol/L HCl 或 NaOH 将 pH 调至 5.0-5.5（用 pH 计或精密试纸检测）。

 

步骤 4：分装与灭菌

 

将培养基分装至锥形瓶（占体积 1/3）或试管，加棉塞 / 硅胶塞，包扎后高压蒸汽灭菌（121，20 分钟）。若含不耐热成分，灭菌后冷却至 50-60时无菌添加（用滤膜过滤除菌）。

 

3、灭菌后处理

 

倒平板：灭菌后取出培养基，冷却至 50-60（不烫手），在超净台内倒入无菌培养皿（每皿约 15-20mL），水平放置冷却凝固（约 30 分钟）。

 

斜面制备：试管培养基灭菌后倾斜放置（成 45° 角），冷却后形成斜面（用于菌种保存）。

 

4、接种与培养

 

接种：无菌操作（超净台内），用接种环取真菌孢子或菌丝，在平板上划线（分离单菌落）或点种（观察生长）。

 

培养条件：

 

温度：多数真菌 25-28（如霉菌），致病性真菌 37（模拟人体环境）。

 

湿度：培养箱内放盛水烧杯，保持湿度 80%-90%（防止培养基干裂）。

 

时间：霉菌 3-7 天，酵母菌 2-3 天，慢生长真菌（如皮肤癣菌）需 1-2 周。

 

5、观察与记录

 

菌落形态：颜色（如青霉呈绿色，曲霉呈黄色）、质地（绒毛状、粉末状）、边缘（整齐或波状）。

 

微观特征：挑取菌丝或孢子，制片后显微镜观察（如曲霉的顶囊结构、青霉的帚状枝）。

 

三、注意事项

 

灭菌彻底：未灭菌的培养基易污染细菌或杂菌，导致真菌生长受抑。

 

pH 准确：酸性不足会抑制真菌，可在灭菌后复测（灭菌可能导致 pH 轻微变化）。

 

无菌操作：接种工具需灼烧灭菌，避免手部接触培养基表面。

 

配方调整：若真菌生长缓慢，可增加碳源 / 氮源浓度（如葡萄糖增至 30g/L）。

 

通过以上原理和方法，可实现真菌的高效培养与分离，满足科研、临床或工业需求。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！