蔗糖胰蛋白胨肉汤的试验方法与现象及结果解读与注意事项！

 

蔗糖胰蛋白胨肉汤（Sucrose Tryptone Broth）是一种常用的液体培养基，主要用于检测细菌是否能够发酵蔗糖。其原理是利用细菌发酵蔗糖产生酸类物质，使培养基中的酚红指示剂变色，从而判断发酵结果。同时，培养基中通常含有倒置的小发酵管，用于收集发酵过程中产生的气体，以判断是否产气。

 

一、试验方法

 

1、培养基制备：

 

成分：胰蛋白胨（提供氮源、碳源、维生素等）、蔗糖（唯一可发酵的碳水化合物）、酚红（pH指示剂）、氯化钠（维持渗透压）、蒸馏水。

 

配制：按配方准确称量各组分，溶解于蒸馏水中。

 

pH调整：用NaOH或HCl将培养基pH调整至7.4±0.2（此时酚红呈红色或橙红色）。

 

分装与灭菌：将培养基分装至试管中，每管约5-10ml。在每支试管中放入一个倒置的小发酵管，确保其完全充满培养基且无气泡。在121°C (15 psi) 下高压蒸汽灭菌15分钟。灭菌后冷却备用。

 

2、接种：

 

在无菌条件下，用接种环挑取待测细菌的纯培养物（通常是一个分离良好的单菌落）。

 

将菌种接种到装有蔗糖胰蛋白胨肉汤的试管中。轻轻旋转试管或上下移动接种环使菌体混匀（避免剧烈震荡导致倒管中有大气泡残留）。

 

同时接种一支未加糖的胰蛋白胨肉汤（基础培养基）作为阴性对照（颜色应保持红色不变），以及一支已知蔗糖阳性菌（如大肠杆菌的部分菌株）和一支已知蔗糖阴性菌（如志贺氏菌或沙门氏菌）作为阳性对照和阴性对照。

 

3、培养：

 

将接种好的试管和对照管放入恒温培养箱中。

 

通常在35-37°C下培养。

 

培养时间一般为18-24小时。如果24小时后无变化，可继续培养至48小时再观察，特别是对生长较慢的细菌。

 

4、观察：

 

颜色变化：观察培养基颜色的变化，特别注意与未接种管和阴性对照管比较。

 

气体产生：观察倒置的小发酵管内是否有气泡聚集。气泡体积占倒管体积的10%或以上通常被认为是阳性（产气）。

 

二、现象与结果解读

 

1、阳性反应（蔗糖发酵）：

 

产酸：细菌发酵蔗糖产生酸性代谢产物（如乳酸、乙酸等）。

 

现象：培养基中的酚红指示剂由红色/橙红色变为黄色（pH下降至6.8以下）。这是蔗糖发酵的主要标志。

 

产气（可选）：如果发酵过程同时产生气体（如CO和H）。

 

现象：倒置的小发酵管内出现气泡（大小至少占倒管体积的10%）。

 

结果描述：蔗糖发酵阳性（A）或蔗糖发酵产酸产气阳性（A/G）。

 

2、阴性反应（蔗糖不发酵）：

 

不产酸：细菌不能利用蔗糖作为碳源进行发酵，或者代谢途径不产酸。

 

现象：培养基颜色保持不变（红色或橙红色），或有时因细菌分解蛋白胨产生碱性物质而变为更深的红色（紫红色）（碱性反应）。倒管中没有气泡或气泡体积小于10%。

 

结果描述：蔗糖发酵阴性（-）。

 

3、特殊情况：

 

产碱反应：如果细菌不能发酵蔗糖但能强烈分解培养基中的蛋白胨产生碱性产物，可能导致培养基由红色变为深红色或紫红色。这也属于蔗糖发酵阴性。

 

迟缓发酵：少数细菌可能在24小时内不发酵，但延长培养时间（如48小时）后出现黄色变化（阳性）。

 

微弱产气：气泡非常小（<10%倒管体积）通常视为不产气（阴性）。

 

三、重要注意事项

 

无菌操作：整个接种过程必须严格无菌，避免污染导致假阳性或假阴性。

 

纯培养物：必须使用待测细菌的纯培养物进行接种，混合培养会导致结果无法解释。

 

对照设置：设置未接种对照、阳性对照（已知蔗糖阳性菌）和阴性对照（已知蔗糖阴性菌）对于正确解读结果至关重要。对照管的结果应符合预期。

 

正确判读颜色：观察颜色变化时，要在良好的白光下进行，并与对照管比较。注意区分黄色（酸性）、橙红色（中性/初始状态）和红色/紫红色（碱性）。

 

倒管气泡：接种后和培养前，确保倒管内没有残留的大气泡（小气泡可以忽略）。培养后观察到的气泡应是发酵新产生的。

 

培养时间：严格遵守推荐的培养时间和温度。过早或过晚观察都可能导致误判。

 

四、应用

 

蔗糖胰蛋白胨肉汤主要用于：

 

肠杆菌科细菌的初步鉴定和分群（例如，大肠杆菌通常蔗糖阳性，而沙门氏菌和志贺氏菌通常蔗糖阴性）。

 

其他需氧和兼性厌氧细菌的糖发酵能力鉴定。

 

筛选能够利用蔗糖作为碳源的细菌。

 

通过观察蔗糖胰蛋白胨肉汤培养后的颜色变化和气体产生情况，可以快速判断细菌是否具有发酵蔗糖并产酸的能力，这是细菌生化鉴定中一项常用且重要的试验。

 

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