含糖牛肉琼脂培养基的主要应用和使用方法及注意事项！

 

百欧博伟生物：含糖牛肉琼脂培养基是一种营养丰富、并添加了特定糖类和指示剂的固体培养基，主要用于培养营养要求不高的细菌（非苛养菌），并观察它们是否能够发酵特定的糖类以及是否产生气体。它在微生物学鉴定中很常用。

 

一、原理

 

1、营养基础（牛肉浸粉 + 蛋白胨）：

 

牛肉浸粉：提供水溶性生长因子（如维生素、核苷酸、氨基酸）、碳源、氮源、矿物质等。

 

蛋白胨：主要提供有机氮源（氨基酸、多肽）、部分碳源和生长因子。

 

这两者共同为多种细菌的生长提供必需的营养物质。

 

2、糖类：

 

培养基名称中的“含糖”特指添加了一种或多种特定的糖（如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇等）。

 

作用：作为可发酵的碳水化合物来源。

 

发酵原理：如果细菌具有发酵该种糖的能力，它会在代谢过程中将糖分解产生酸性产物（主要是各种有机酸）。如果发酵类型属于产酸产气型，还会产生气体（CO和/或H）。

 

3、指示剂：

 

最常用的是酚红。

 

作用原理：酚红是一种pH指示剂。

 

中性或弱碱性 (pH ≈ 7.4)：呈红色或粉红色（培养基制备后的初始颜色）。

 

酸性 (pH < 6.8)：呈黄色。

 

当细菌发酵糖产生酸性产物时，培养基的pH值下降，导致酚红由红色/粉红色变为黄色，从而直观地指示发酵产酸的发生。

 

4、琼脂：

 

作为凝固剂，将液体培养基转变为固体状态（通常添加约1.5%），便于分离菌落、观察菌落形态和进行纯培养。

 

5、氯化钠：

 

维持等渗环境，保证细菌细胞正常的渗透压。

 

二、使用方法

 

1、培养基制备：

 

按照商品化干粉培养基的说明书准确称取所需量。

 

加入规定体积的蒸馏水或去离子水。

 

搅拌加热至完全溶解。注意含糖培养基加热时间不宜过长、温度不宜过高，避免糖类焦化。

 

调节pH：通常需要调节pH至7.3-7.5左右（中性偏碱，使酚红呈红色）。使用pH计或精密pH试纸，用NaOH或HCl溶液调节。

 

分装：根据需要将溶解均匀的培养基分装到试管（制成斜面或深层琼脂）或三角瓶（用于倒平板）中。

 

灭菌：使用高压蒸汽灭菌。由于含糖，灭菌温度和时间需特别注意：

 

推荐条件：115°C (0.7 kg/cm² 或 10 psi) 高压灭菌15-20分钟。

 

避免使用121°C灭菌！高温长时间灭菌会导致糖类（特别是葡萄糖）与培养基中的氨基酸发生美拉德反应（褐变），产生抑制物质并影响指示剂颜色观察。灭菌后冷却备用。倒平板时温度控制在约50°C。

 

2、接种：

 

目的：将待测的纯培养细菌接种到培养基上。

 

方法（根据培养基形态）：

 

斜面：用接种针挑取单菌落，在琼脂斜面上划一条连续的“之”字形线。

 

深层琼脂管（常含小倒管）：用接种针穿刺接种到培养基深层底部。培养基中预先放置一个小导管，用于收集发酵产生的气体（气体进入倒管形成气泡）。

 

平板：主要用于分离培养和观察菌落形态。点种或划线接种均可。观察发酵需结合菌落周围培养基颜色变化（产酸区变黄）。

 

3、培养：

 

将接种好的培养基置于适合目标细菌生长的恒温培养箱中（通常为35-37°C）。

 

培养适当的时间（通常18-24小时，有时需更长时间）。

 

4、结果观察与判读：

 

生长情况：检查是否有细菌生长（菌苔、菌落）。

 

糖发酵（产酸）：

 

培养基颜色由红/粉红变为黄色：表示细菌发酵了该糖并产酸（+）。

 

培养基颜色不变或仍为红/粉红：表示细菌不发酵该糖或发酵能力很弱（-）。

 

糖发酵（产气）：（主要针对深层琼脂管）

 

小倒管中有气泡（体积≥10%倒管容积）：表示发酵产酸的同时还产生气体（+）。

 

小倒管中无气泡：表示只产酸不产气或完全不发酵（-）。

 

平板观察：菌落周围出现黄色晕圈表示产酸。

 

三、主要应用

 

细菌的分离培养：作为营养琼脂的增强版，支持多种非苛养菌的生长。

 

糖发酵试验：是鉴定细菌生化特性的核心试验之一。

 

帮助区分肠杆菌科细菌（如大肠埃希菌通常发酵乳糖产酸产气，而沙门菌、志贺菌通常不发酵乳糖或发酵不产气）。

 

帮助区分葡萄球菌（通常发酵葡萄糖和甘露醇）和微球菌（通常不发酵）。

 

鉴定其他革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性球菌的糖发酵能力。

 

初步鉴定：结合细菌形态、革兰染色结果和其他生化试验，用于细菌的初步鉴定。

 

四、关键注意事项

 

灭菌温度：必须使用115°C灭菌，避免121°C导致糖类破坏和培养基变质。 这是使用含糖培养基最重要的一点。

 

无菌操作：所有步骤必须严格遵守无菌操作规程。

 

pH调节：灭菌前的pH值至关重要，直接影响指示剂的初始颜色和判读准确性。

 

对照：进行试验时，最好同时设置已知阳性菌株和阴性菌株的对照，以验证培养基的有效性。

 

培养时间：观察结果应在推荐的培养时间进行。过早可能反应不充分，过晚可能导致细菌代谢掉酸性产物（逆转反应）或产生其他碱性产物干扰判读。

 

指示剂选择：酚红最常用，但有时也会使用其他指示剂（如溴甲酚紫）。判读颜色变化时要了解所用指示剂的变色范围。

 

糖的种类：明确培养基中添加的是哪种糖（葡萄糖、乳糖等），不同糖的发酵结果意义不同。

 

总结：

 

含糖牛肉琼脂培养基通过提供丰富的营养基础（牛肉浸粉+蛋白胨）、特定的可发酵糖类（如葡萄糖、乳糖等）和pH指示剂（酚红），结合琼脂固化，使得我们能够在支持细菌生长的同时，直观地观察细菌是否发酵该糖（产酸变黄）以及是否产气（深层管倒管有气泡）。它是微生物学实验室进行细菌培养、分离和初步生化鉴定（尤其是糖发酵试验）的基础且重要的工具。正确掌握其原理和使用方法（特别是115°C灭菌）对于获得可靠结果至关重要。

 

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