酵母菌碳源同化的试验方法与操作步骤及应用场景！

 

酵母菌的碳源同化试验是微生物学中用于鉴定酵母菌种类的重要生化试验之一，通过检测酵母能否利用特定碳源作为唯一碳源进行生长，从而判断其代谢特性。以下是该试验的详细说明：

 

一、试验目的

 

分类鉴定：确定酵母菌对不同碳源的利用能力，辅助菌种鉴定（如区分念珠菌属、隐球菌属等）。

 

代谢研究：分析酵母菌的碳代谢途径及生理特性。

 

应用价值：筛选具有工业潜力的酵母菌株。

 

二、试验原理

 

酵母菌在仅含某一种碳源（如糖类、醇类等）的基础培养基中生长时，若能同化该碳源，则会通过代谢产生能量和细胞物质，表现为可见的生长（浊度增加或菌落形成）；若不能利用，则无生长。

 

三、试验材料

 

基础培养基（无碳源）：

 

成分：硫酸铵（氮源）、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、微量元素，琼脂（固体培养基需添加）。

 

示例配方（液体培养基）：

 

(NH)SO 5g, KHPO 1g, MgSO·7HO 0.5g, CaCl·2HO 0.1g, 蒸馏水 1L, pH 5.5-6.0。

 

碳源：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、木糖、半乳糖、甘油等（终浓度通常为0.5-2%）。

 

对照：

 

阳性对照：含葡萄糖的培养基（所有酵母均能利用）。

 

阴性对照：无碳源培养基（应无生长）。

 

其他：无菌试管/微孔板、接种环、恒温培养箱（25-30）等。

 

四、试验步骤

 

方法1：固体培养基法

 

配制培养基：

 

基础培养基分装后分别加入不同碳源，灭菌后倒平板。

 

接种：

 

用无菌棉签或接种环将酵母菌悬液（约10 CFU/mL）点种于平板表面。

 

培养：

 

25-30培养3-7天，观察菌落生长情况。

 

方法2：液体培养基法（API 20C AUX系统）

 

接种：

 

将酵母菌悬液加入含不同碳源的微孔中。

 

培养：

 

30培养24-72小时，观察浊度变化。

 

五、结果判读

 

阳性：培养基变浑浊（液体）或形成菌落（固体），表明酵母能利用该碳源。

 

阴性：无生长迹象。

 

示例：

 

酿酒酵母：同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不利用乳糖。

 

白念珠菌：同化葡萄糖、麦芽糖、半乳糖，不利用硝酸盐。

 

六、注意事项

 

碳源纯度：避免含杂质（如商业糖可能含微量葡萄糖）。

 

接种量均一：过量接种可能导致假阳性（带入残留碳源）。

 

培养时间：部分酵母生长缓慢（如隐球菌需培养7天以上）。

 

交叉验证：结合氮源同化试验或其他鉴定方法（如形态学、分子生物学）。

 

七、常见问题

 

假阴性：

 

可能原因：碳源浓度过高（抑制生长）、培养时间不足。

 

解决：调整碳源浓度至0.5-1%，延长培养时间。

 

假阳性：

 

可能原因：培养基污染或接种工具携带碳源。

 

解决：严格无菌操作，设置阴性对照。

 

八、应用场景

 

临床诊断：快速鉴定致病酵母（如区分光滑念珠菌与克柔念珠菌）。

 

工业微生物学：筛选能利用木质纤维素水解物的菌株用于生物燃料生产。

 

环境微生物学：研究酵母在特定生态系统中的碳代谢功能。

 

通过碳源同化试验，可系统了解酵母菌的代谢多样性，为分类和功能研究提供关键依据。如需进一步鉴定，建议结合分子生物学方法。

 

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