细胞实验换液的操作指南与注意事项及常见问题与处理！

 

百欧博伟生物：在细胞培养实验中，换液（更换培养基）是维持细胞健康的关键步骤，以下是详细的换液操作指南及注意事项：

 

一、换液目的

 

清除细胞代谢废物（如乳酸、氨等）。

 

补充新鲜营养，促进细胞生长。

 

避免培养基酸化（pH下降导致培养基变黄）。

 

二、换液时机

 

1、常规频率：根据细胞类型调整，一般为每1-3天一次。

 

2、观察信号：

 

培养基变黄（pH下降）。

 

细胞密度达80%以上。

 

培养基浑浊或有漂浮物（可能污染）。

 

三、操作步骤

 

1、准备工作

 

试剂/器材：

 

新鲜培养基（37水浴预热30分钟）。

 

预温的PBS（用于清洗细胞）。

 

移液器、无菌移液管/枪头、废液缸。

 

75%酒精喷洒超净台，开启紫外灭菌30分钟。

 

2、换液流程

 

（1）取出细胞：

 

从培养箱中取出培养瓶/皿，显微镜下观察细胞状态。

 

倾斜容器（如培养瓶），使液体集中一角，避免触碰细胞层。

 

（2）弃旧培养基：

 

用移液管或真空泵（低吸力）轻柔吸弃旧培养基。

 

注意：若为悬浮细胞，需离心（如1000 rpm, 5分钟）后再去上清。

 

（3）清洗细胞：

 

沿培养器皿边缘缓慢加入预温的PBS（体积与培养基相当，如6孔板每孔加2ml）。

 

轻轻晃动清洗，吸弃PBS。重复1-2次（对代谢废物多的细胞）。

 

（4）添加新培养基：

 

沿侧壁缓慢加入预热的新鲜培养基（体积与原培养基一致，如T25瓶加5ml）。

 

避免直接冲击细胞层，防止细胞脱落。

 

（5）放回培养箱：

 

拧松培养瓶盖（保证气体交换），平稳放回37、5% CO培养箱。

 

3、后续处理

 

旧培养基需高压灭菌（生物污染风险）后丢弃。

 

记录换液时间、细胞密度及形态变化。

 

四、注意事项

 

1、无菌操作：

 

全程在超净台酒精灯火焰附近操作。

 

试剂瓶口过火后开闭，移液管勿触碰其他物品。

 

2、温度控制：

 

培养基和PBS需严格预热至37，避免冷刺激导致细胞脱落。

 

3、轻柔操作：

 

吸液时枪头勿接触细胞层（尤其贴壁不牢的细胞如原代细胞）。

 

4、特殊细胞处理：

 

悬浮细胞：换液需离心收集细胞，保留沉淀后重悬于新培养基。

 

半贴壁细胞：部分细胞可能漂浮，可保留少量旧培养基。

 

五、常见问题

 

1、换液后细胞死亡：

 

可能原因：操作力度过大、PBS残留、培养基pH异常或污染。

 

处理：检查试剂有效期，缩短换液时间，规范无菌操作。

 

2、细胞污染：

 

若培养基浑浊或出现异常颗粒，立即停止操作，高压灭菌丢弃，并用75%酒精清洁培养箱。

 

3、细胞脱落：

 

减少PBS冲洗次数，动作轻柔，或改用含钙/镁的缓冲液（维持贴附）。

 

六、扩展提示

 

首次换液前：确认细胞贴壁情况。

 

高密度细胞：可适当增加换液频率。

 

无血清培养：换液需更频繁。

 

通过规范换液操作，可显著提高细胞实验的稳定性和重复性。若需进一步优化，建议根据特定细胞系的培养手册调整细节。

 

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