霉菌与酵母菌的鉴定方法分类与操作流程及应用与挑战！

 

霉菌和酵母菌均属于真菌界，但在形态、生理及生态特性上存在显著差异。其鉴定方法结合传统技术与现代分子生物学手段，旨在准确区分种类，尤其在医学、食品工业和环境监测中具有重要意义。

 

一、鉴定方法分类

 

1、传统形态学鉴定

 

霉菌：

 

菌落观察：菌落形态（绒毛状、棉絮状）、颜色（如青霉的蓝绿色）、边缘特征。

 

显微结构：菌丝分隔与否、孢子类型（分生孢子、孢囊孢子）及产孢结构（孢子囊、分生孢子梗）。

 

示例：曲霉的顶囊和分生孢子链，毛霉的无隔菌丝及孢囊孢子。

 

酵母菌：

 

菌落特征：光滑湿润、多为乳白色（如酿酒酵母）。

 

显微镜检：单细胞形态（椭圆形、圆形）、出芽繁殖（芽痕）、假菌丝形成（如念珠菌属）。

 

2、生理生化特性分析

 

碳/氮源利用：API 20C系统测试糖类同化（如酵母对葡萄糖 vs. 乳糖的利用）。

 

发酵试验：酵母的产气能力（杜氏管观察CO）。

 

温度耐受：白色念珠菌在37生长良好，多数环境霉菌偏好25-30。

 

显色培养基：CHROMagar™快速区分致病性念珠菌（如白色念珠菌显绿色）。

 

3、分子生物学技术

 

靶基因测序：

 

霉菌：ITS区域（内转录间隔区）为主，辅以β-tubulin基因。

 

酵母菌：D1/D2区（26S rDNA）或ITS测序，如隐球菌的鉴定。

 

MALDI-TOF MS：基于蛋白质谱快速鉴定至种水平，适用于临床酵母分离株。

 

全基因组测序：研究毒力基因或耐药性（如耐氟康唑的假丝酵母菌）。

 

二、鉴定流程

 

1、样本处理：无菌采集后预处理（研磨、稀释），选择性培养基抑制细菌（含氯霉素的SDA）。

 

2、分离培养：

 

霉菌：沙氏葡萄糖琼脂（SDA）或马铃薯葡萄糖琼脂（PDA），25-28培养3-7天。

 

酵母菌：YPD培养基或麦芽汁琼脂，30培养24-48小时。

 

3、初步筛选：菌落形态、颜色、气味（如红酵母的红色素）。

 

4、深入鉴定：

 

形态不明确时，采用小培养（霉菌）或玉米粉琼脂诱导酵母假菌丝。

 

生理试验（尿素酶试验区分新型隐球菌）。

 

分子确认：PCR扩增后测序比对GenBank数据库。

 

三、应用与挑战

 

1、临床诊断：快速鉴定病原真菌（如烟曲霉、白色念珠菌）指导抗真菌治疗。

 

2、工业监控：发酵过程中污染菌的检测（如鲁氏接合酵母污染果汁）。

 

3、难点：

 

双相真菌：需在不同温度下培养（如组织胞浆菌在37呈酵母相）。

 

近缘种区分：需多基因联合分析（如曲霉属的复合种）。

 

四、技术进展

 

1、自动化系统：VITEK 2 YST卡实现酵母快速鉴定（4-18小时）。

 

2、宏基因组学：环境样本中直接检测真菌群落，无需培养。

 

3、CRISPR检测：开发特异性探针用于即时诊断（如热带念珠菌的快速识别）。

 

五、总结

 

霉菌与酵母菌的鉴定需综合形态、生理及分子特征，传统方法为基础，分子技术提升精确度。未来趋向于高通量、自动化，以满足临床和环境监测的快速需求。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！