微生物增菌与分离培养基的使用方法及常见问题与解决方案！

 

百欧博伟生物：在微生物学中，使用增菌培养基和分离培养基是分离混合菌株的常用方法，尤其适用于从复杂样本（如临床、环境或食品样本）中富集目标微生物并最终获得纯培养。以下是具体的步骤和原理：

 

一、增菌培养基（Enrichment Media）

 

1、目的：选择性促进目标菌的生长，抑制非目标菌（通过添加特定营养物质或抑制剂）。

 

2、常用增菌培养基举例：

 

液体硫乙醇酸盐培养基：用于厌氧菌（如梭菌）的增菌。

 

亚硒酸盐肉汤：用于沙门氏菌的富集。

 

碱性蛋白胨水：用于霍乱弧菌的增菌。

 

7.5% NaCl肉汤：选择性富集耐盐的金黄色葡萄球菌。

 

3、操作步骤：

 

将混合菌液或样本接种到增菌培养基中。

 

在适宜温度下培养（例如37, 18-24小时）。

 

目标菌会大量增殖，而其他菌的生长被抑制。

 

二、分离培养基（Isolation Media）

 

1、目的：通过物理（划线法）或化学（选择性/鉴别性成分）方法将混合菌分离为单个菌落。

 

2、常用分离培养基类型：

 

选择性培养基：

 

麦康凯琼脂（MacConkey Agar）：抑制革兰氏阳性菌，分离革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）。

 

甘露醇盐琼脂（MSA）：高盐抑制非葡萄球菌，同时通过甘露醇发酵鉴别金黄色葡萄球菌。

 

SS琼脂：抑制大肠杆菌，选择性分离沙门氏菌和志贺氏菌。

 

鉴别性培养基：

 

血琼脂（Blood Agar）：通过溶血现象区分链球菌（如α、β溶血）。

 

伊红美蓝琼脂（EMB）：通过菌落颜色鉴别大肠杆菌（金属光泽）和肠杆菌属。

 

3、操作步骤：

 

取增菌后的菌液，用划线法在固体分离培养基上分区划线。

 

培养后观察单个菌落（不同菌的形态、颜色、溶血性等特征不同）。

 

挑取单个菌落进行纯培养和进一步鉴定（如生化试验、PCR等）。

 

三、常见问题与解决方案

 

1、增菌失败：

 

检查培养基是否过期或配制错误。

 

调整培养条件（温度、时间、需氧/厌氧环境）。

 

确认抑制剂浓度是否合适（如过高可能抑制目标菌）。

 

2、分离不纯：

 

重新划线（确保分区充分，减少菌量）。

 

结合多种选择性培养基（例如同时使用麦康凯和SS琼脂）。

 

延长培养时间观察慢生长菌。

 

3、目标菌被掩盖：

 

使用显色培养基（如沙门氏菌显色培养基）。

 

采用梯度稀释法减少竞争菌的数量。

 

四、示例流程（以分离沙门氏菌为例）

 

增菌：样本接种到亚硒酸盐肉汤，37培养18-24小时。

 

分离：取增菌液划线接种于SS琼脂和麦康凯琼脂，37培养24小时。

 

鉴定：挑取无色透明菌落（SS琼脂上）或乳糖不发酵菌落，进行生化试验（如TSI、尿素酶）或血清学检测。

 

五、注意事项

 

无菌操作：避免交叉污染。

 

对照实验：同时接种已知菌株作为阳性/阴性对照。

 

培养基选择：根据目标菌特性选择组合（如增菌+选择性+鉴别性培养基）。

 

通过以上方法，可高效分离混合菌株中的目标微生物，并排除干扰菌的竞争。

 

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