细菌简单染色的实验原理与材料及操作步骤与注意事项！

 

一、实验目的

 

通过单一染色剂增强细菌与背景的对比度，便于在光学显微镜下观察其形态、大小及排列方式。

 

二、实验原理

 

电荷吸附：碱性染料（如结晶紫、亚甲蓝）带正电荷，与带负电荷的细菌细胞壁结合。

 

物理吸附：染料通过渗透作用进入细胞，使菌体着色。

 

适用场景：适用于初步观察形态，不区分结构（如革兰氏染色）。

 

三、实验材料

 

菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或葡萄球菌。

 

染色剂：0.5%结晶紫或亚甲蓝。

 

器材：载玻片、接种环、酒精灯、显微镜（油镜）、香柏油、吸水纸、生理盐水。

 

四、实验步骤

 

1、涂片制备

 

灭菌载玻片：用酒精清洁后，在火焰上短暂灼烧。

 

滴加生理盐水：取1滴于载玻片中央。

 

取菌：接种环灼烧冷却后，挑取少量菌苔，均匀涂布成薄膜。

 

干燥：室温晾干或微热烘干。

 

固定：快速通过火焰3次，避免过热（以玻片不烫手为准）。

 

2、染色

 

滴加染料：覆盖菌膜，染色1分钟（时间依染料浓度调整）。

 

冲洗：倾去染液，用细水流从玻片一端轻冲，避免直接冲击菌膜。

 

干燥：吸水纸轻压吸干或自然晾干。

 

3、镜检

 

油镜使用：滴香柏油，用油镜观察并记录形态（如杆菌、球菌的排列）。

 

五、注意事项

 

涂片厚度：过厚导致细胞重叠，影响观察。

 

固定温度：避免高温破坏细胞形态。

 

染色时间：过长过深，过短过浅，需优化（通常0.5-2分钟）。

 

冲洗技巧：水流轻柔，防止样本流失。

 

镜头维护：油镜使用后及时用二甲苯擦拭。

 

六、常见问题分析

 

染色过浅：时间不足或染料浓度低。

 

菌体脱落：固定不充分或冲洗过猛。

 

背景过深：未彻底冲洗多余染料。

 

七、关键细节

 

生理盐水作用：维持等渗，防止细胞破裂。

 

加热固定目的：杀死细菌并牢固粘附于载玻片。

 

染料选择：碱性染料优先，如结晶紫（对比度更高）。

 

通过本实验，可清晰观察细菌的基本形态（如杆状、球状）及排列方式（链状、簇状），为后续复杂染色技术奠定基础。

 

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