H9c2大鼠心肌细胞的培养条件与分化诱导及应用领域！

大鼠心肌细胞系H9c2（也称为H9c2(2-1)）是心血管研究中广泛使用的实验模型。以下是关于该细胞系的详细信息，包括其特性、应用及实验操作要点：

一、细胞系背景

1、来源：H9c2细胞系源自胚胎期BD1X大鼠的心脏组织，由Kimes和Brandt于1976年建立。

2、特性：

未分化时表现为成肌细胞形态（梭形、贴壁生长），可诱导分化为心肌样细胞。

保留部分心肌细胞特征，如表达肌球蛋白轻链、肾上腺素受体等，但缺乏成熟心肌细胞的横纹结构和同步收缩能力。

增殖能力强，易于传代培养，适用于高通量实验。

二、培养条件

1、培养基：高糖DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），添加10%胎牛血清（FBS）和1%双抗（青霉素/链霉素）。

2、培养环境：37°C、5% CO，湿度饱和。

3、传代方法：

吸除旧培养基，用PBS清洗细胞。

加入0.25%胰酶（含EDTA）消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆后终止消化。

按1:3至1:6比例传代，密度过低可能导致生长停滞。

三、分化诱导

1、常用方法：

血清浓度降低法：将培养基更换为含1% FBS的DMEM，持续培养7-14天。

视黄酸（RA）诱导：在含1% FBS的培养基中加入10 μM全反式视黄酸，处理3-7天。

2、分化标志：

形态变长，出现多核肌管样结构。

上调心肌标志物（如肌钙蛋白I、α-肌动蛋白、连接蛋白43）。

四、应用领域

心血管疾病模型：模拟心肌缺血/再灌注损伤、心肌肥厚、缺氧等病理过程。

药物筛选：评估药物心脏毒性（如阿霉素诱导的凋亡）或潜在心脏保护剂。

分子机制研究：通过基因编辑（CRISPR、siRNA）研究信号通路（如AMPK、PI3K/AKT）对心肌细胞的影响。

五、注意事项

分化能力差异：不同实验室或传代次数的H9c2分化效率可能不同，建议使用低传代细胞（<20代）。

支原体污染：定期检测，避免实验偏差。

功能验证：分化后需通过qPCR、Western blot或钙离子成像确认心肌特性。

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