细胞融合技术的特点与原理及主要方法与操作步骤！

 

细胞融合技术是指将两个或多个细胞合并形成一个杂交细胞的过程，广泛应用于遗传学、免疫学、癌症研究及生物制药等领域（如单克隆抗体制备）。以下是细胞融合的主要方法及其原理、步骤和特点：

 

一、化学诱导融合法

 

1、聚乙二醇（PEG）法

 

原理：PEG是一种高分子聚合物，可破坏细胞膜脂质层的稳定性，促使相邻细胞膜融合。

 

步骤：

 

预处理细胞（如酶解去除细胞壁，适用于植物或真菌细胞）。

 

将细胞悬浮液与PEG（浓度通常为30%-50%）混合。

 

短时间（1-10分钟）孵育后，用缓冲液洗去PEG。

 

培养融合细胞并筛选杂交细胞。

 

优点：成本低、操作简单。

 

缺点：PEG对细胞有毒性，融合效率受浓度、分子量、处理时间影响。

 

2、其他化学试剂

 

如溶血卵磷脂、Ca²离子载体等，但应用较少。

 

二、物理诱导融合法

 

1、电融合法（Electrofusion）

 

原理：利用短时高压电脉冲使细胞膜形成可逆性微孔，促使相邻细胞膜融合。

 

步骤：

 

预处理细胞（如低渗处理使细胞紧密接触）。

 

将细胞置于非均匀交变电场（介电泳）中排列成链状。

 

施加高压直流电脉冲（1-10 kV/cm，微秒级）击穿细胞膜。

 

细胞膜修复过程中发生融合。

 

优点：融合效率高（可达80%以上）、无化学毒性、参数可控。

 

缺点：设备昂贵，需优化电场强度、脉冲时间等参数。

 

2、激光诱导融合

 

通过聚焦激光束在特定位置击穿细胞膜，诱导局部融合，适用于单细胞操作，但设备复杂。

 

三、生物诱导融合法

 

1、病毒介导融合

 

原理：某些病毒（如灭活的仙台病毒）表面的糖蛋白可介导细胞膜融合。

 

步骤：

 

灭活病毒（如紫外线或β-丙内酯处理）。

 

病毒与细胞混合，离心促进接触。

 

病毒糖蛋白触发膜融合。

 

优点：适用于动物细胞，尤其淋巴细胞。

 

缺点：存在生物安全风险，病毒制备复杂，现多被PEG或电融合取代。

 

四、其他新兴技术

 

微流控技术：通过微通道控制细胞接触，结合电场或化学诱导，实现高通量融合。

 

磁珠辅助融合：利用抗体标记的磁性颗粒聚集特定细胞，再诱导融合。

 

五、应用场景

 

单克隆抗体制备（如杂交瘤技术）。

 

植物体细胞杂交（如马铃薯-番茄“Pomato”）。

 

基因功能研究（融合细胞用于基因互补分析）。

 

癌症与发育生物学研究（如研究细胞分化潜能）。

 

六、注意事项

 

细胞类型匹配：不同细胞（如上皮细胞与淋巴细胞）的融合效率差异大。

 

筛选系统：常用HAT培养基筛选杂交细胞（亲本细胞缺乏TK或HGPRT酶）。

 

毒性控制：PEG浓度过高或处理过久会导致细胞死亡。

 

生物安全：病毒介导法需遵守生物安全规范。

 

七、总结

 

细胞融合技术的选择取决于实验目的、细胞类型和资源条件。传统PEG法适合基础研究，电融合法适用于高效率需求，而病毒法逐渐被替代。随着技术进步，精准可控的新型融合方法（如光控、微流控）正成为研究热点。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！