微生物标准菌株复活的准备工作与活化步骤及注意事项！

 

标准菌株的复活是微生物实验中的基础操作，目的是将保存的菌种恢复到活性状态，确保其可用于后续实验。以下是标准菌株复活的详细步骤和注意事项：

 

一、准备工作

 

1、确认菌株信息

 

查阅菌株说明书，明确其培养基、培养温度、气体条件（需氧/厌氧）及保存方式（冻干粉、甘油管、斜面等）。

 

确认菌株的生物安全等级（如BSL-1、BSL-2），采取相应的防护措施。

 

2、准备培养基

 

根据菌株需求配制液体和固体培养基（如LB培养基、TSB、血琼脂等），灭菌后备用。

 

对于苛养菌（如某些厌氧菌或营养缺陷菌），需添加特定生长因子或血清。

 

3、器材准备

 

无菌接种环、移液枪、枪头、培养皿、试管等。

 

超净工作台（提前紫外灭菌30分钟）、恒温培养箱、摇床（针对液体培养）。

 

4、预培养条件

 

预热培养基至适宜温度（如37），避免冷刺激影响复苏。

 

二、菌株活化步骤

 

1、冻干粉菌株的复活

 

（1）复水溶解：

 

在超净台中，用无菌移液枪吸取0.5-1 mL液体培养基或专用复溶液（如TSB），注入冻干粉安瓿瓶，轻轻吹吸混匀。

 

（2）静置活化：

 

将菌悬液转移至无菌试管中，静置30分钟至1小时（某些菌需预培养）。

 

（3）初代培养：

 

液体培养：取部分菌悬液接种至液体培养基，摇床培养（如37、200 rpm）。

 

固体培养：划线接种至固体培养基，倒置培养。

 

2、甘油管或冷冻保存菌的复活

 

（1）快速解冻：

 

将甘油管从-80或液氮中取出，迅速置于37水浴中融化（10-20秒）。

 

避免反复冻融，解冻后立即使用。

 

（2）接种培养：

 

取少量菌液划线或接种至液体培养基，根据菌株需求培养（如厌氧菌需使用厌氧罐）。

 

三、复苏后验证

 

1、观察生长情况

 

液体培养基：观察浊度变化（如OD600值）。

 

固体培养基：检查菌落形态（大小、颜色、边缘、溶血性等是否与标准一致）。

 

2、染色鉴定

 

革兰氏染色：确认菌体形态（球菌/杆菌）和染色特性（G/G）。

 

抗酸染色（针对分枝杆菌属）。

 

3、生化试验

 

进行关键生化反应（如氧化酶、触酶、糖发酵试验等），比对标准特征。

 

4、分子鉴定（可选）

 

16S rRNA测序或特异性PCR，确认菌株基因型。

 

5、纯度检查

 

连续传代后观察是否污染杂菌。

 

四、菌株保存

 

1、短期保存

 

斜面或半固体穿刺培养基（4保存，1-3个月）。

 

2、长期保存

 

甘油管（15%-30%甘油，-80或液氮保存）。

 

冻干保存（需专用冻干机）。

 

五、注意事项

 

1、无菌操作：全程在超净台中进行，避免污染。

 

2、生物安全：

 

高致病性菌株需在生物安全柜（BSC）中操作，废弃物高压灭菌。

 

3、菌株稳定性：

 

避免多次传代导致表型或基因型改变，建议使用低传代数菌株。

 

4、特殊菌株处理：

 

对氧气敏感的菌株需在厌氧环境中操作（如厌氧工作站）。

 

对温度敏感的菌株避免高温解冻。

 

六、常见问题与解决

 

1、菌株不生长：

 

检查培养基成分、pH、温度是否合适；确认保存菌株是否失活。

 

2、污染杂菌：

 

重新划线纯化，或使用选择性培养基。

 

3、表型异常：

 

可能因保存时间过长或传代过多，建议重新复活原始菌株。

 

通过以上步骤，可有效复活标准菌株并确保其活性和纯度，为后续实验提供可靠菌源。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！