PBMC人外周血单核细胞的复苏与传代及冻存操作说明！

 

细胞简介

平台编号：Bio-133819

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：PBMC

细胞名称：人外周血单核细胞PBMC

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6；1x10^6

保存温度：37；-198

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途：限制仅供科研1类

培养体系：90%DMEM+10S+1%三抗

培养温度：37

二氧化碳浓度：5%

简介：人外周血单核细胞PBMC取自女性外周血，此细胞悬浮培养。

注释：倍增时间45h

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

 

细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管

实验步骤：

1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。

2、从 37水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。

3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟。

4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37培养箱静置培养。

5、次日更换一次培养液，继续培养。

6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。

 

细胞传代操作说明（贴壁细胞）

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管

实验步骤：

1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。

2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。

3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。

 

细胞传代操作说明（悬浮细胞）

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管

实验步骤：

1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。

2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。

3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。

 

细胞冻存操作说明

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞，移液枪 ，枪头 ，离心管，冻存管，记号笔

实验步骤：

1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。

2、加入 1ml 冻存液(90S+10%DMSO )制成细胞悬液。

3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。

4、冻存管在 4下存放 30 min ，转放-20 1.5～2 h ，再转人-70 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196) ，并登记。

 

注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。

易欧赛生物（EOUCELL）是由北京百欧博伟生物技术有限公司开创的专注于科研细胞及其周边产品研发及提供的高端品牌，主要业务涵盖原代细胞、细胞系，细胞培养基及细胞周边耗材等！2024年6月30日，北京百欧博伟生物技术有限公司与武汉易欧赛生物技术有限公司签订战略合作协议，由武汉易欧赛生物技术有限公司进行北京百欧博伟生物技术有限公司品牌易欧赛生物的全方位生物技术支持！