黄暗青霉的背景知识与应用研究及注意事项有哪些？

 

黄暗青霉，本种的菌丝体、菌落反面、渗出液和可搭性色素通常都呈现不同程度的黄色，分生孢子呈现球形或近球形，且小等特征显著。主要用于分类，研究。

 

一、产品信息

平台编号：Bio-66364

规格：冻干粉

拉丁属名：Penicillium Citreonigrum

中文名称：黄暗青霉

拉丁名称：Penicillium citreonigrum

其它保藏中心编号：=CBS 247.67=ATCC 18388

来源历史：←中科院微生物研究所←CBS

收藏时间：2007/7/9

原产国：扎伊尔

模式菌株：模式菌株

主要用途：分类；研究

特征特性：菌落直径53－55mm，颜色深灰绿到深绿，较薄，表面具不规则放射状皱纹，微具同心环纹，菌落质地为粉末状，无渗出液，无可溶性色素，菌落反面颜色为栗棕色。分生孢子少量，闭囊壳呈球形，直径20－30μm，有大量子囊，直径1.5－2.5μm。

生物危害程度：四类

培养基编号：CM0072

培养基名称：麦芽膏琼脂(Malt Extract Agar)

培养基成分：麦芽膏 20.0g，琼脂 20.0g，自来水 1.0L，自然pH。

培养温度：25

需氧类型：好氧

分离基物：土壤

采集地：加丹加省

保存方法：真空冷冻干燥法

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：分类；研究；

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

 

二、背景知识

菌落在CA 上 25培养 12 天，直径 14-25 (-30) mm，具放射状皱纹，有的分离物在中心有脐状突起或凹陆而其他部分则近于平坦；质地絮状或兼有少量绒状；分生抱子结构较少或较多，分生抱子面灰蓝色至灰绿色，近于淡橄榄灰色、橄榄灰色；菌丝体黄色产生大量或较少的谈黄色渗出液滴，偶有分离物则缺乏；反面一致呈现鲜黄或绿黄色；可溶性色素显著，且类似反面的颜色。

菌落在CYA 上 25培养 7 天，直径 18-23mm，放射状皱纹较多或较少，有的分离物在中心有脐状突起而其他部分则平坦：质地絮状或兼有少量缄状；分生于孢子结构较少或在局部面上较多，分生孢子面灰蓝色或蓝绿色，近于淡矿灰色或谈灰橄榄色；菌丝体浅黄色至黄色；渗出液较多或大量，黄色或带绿黄色；反面鲜黄色或桶黄色；可需性色素黄色或绿黄色。

菌落在WA上25培养7天，直径21-26mm，有放射状皱纹或近于平坦，有的分离物较厚或很厚，疏松的气生菌丝体可达4mm厚而边缘则较薄：质地絮状兼有少量绳状；分生孢子结构较多或大量产生，分生抱子面蓝绿色，近于豆绿色或谈灰橄榄色；捧出液大量产生，甚至掩盖了全部皱纹，黄色或黄绿色，而有的分离物则少甚至缺乏E反面黄褐、楠褐或微红黄色；可洛性色素黄色。

菌落在G25N上25培养7天，直径5-lOmm，放射状皱纹少或近于平坦，也有整个菌落隆起者；质地絮状至绒状或兼有绳状；通常产生较多的分生抱子结构，分生抱子面蓝绿色，近于豆绿色，也有的分离物尚未形成分生抱子结构；渗出液缺乏反面淡黄色或楠黄色；可溶性色素波黄色或缺乏。

在CYA上5培养7天：通常萌发或形成微小菌落。

在CYA上37培养7天：直径6-12mm，有规则或不规则的放射状皱纹；质地缄状兼絮状：分生抱子结构少量，分生袍子面灰绿色；无渗出液；反面浅黄褐色；可溶性色素缺乏。也有不萌发的分离物。

分生孢子梗通常发生于气生菌丝或拖曳的菌丝，发生于菌丝绳者少，抱梗茎10-80 （一100）×1. 6-2. 0 (-2. 5) µm，壁平滑，无囊状膨大；帚状枝单轮生，偶有梗基状分枝或双轮生；瓶梗每轮6一10个，6.0-9.0(-11)×1. 8-2. 2 (一2.5) µm, 瓶状，梗颈短至较明显；分生抱子呈现球形或近球形，1.8一2.5 (-2. 8) µm，壁平滑5分生抱子链疏松、短，不规则或近于圆柱状。

新模式：IMI92209i。

分布：较广布种，不常能分离。我国有河北小五台山；湖北神农架；广西桂林市、凭祥市、南宁市；四川佛山；贵州江口县；新疆吐鲁番。

基物：土壤、燕麦、霉茶叶、霉黠菌、鸟尸体、锯末、虫卵、虫粪和烂叶。

代谢产物：桶霉素（citrinin），黄绿青霉素 ( citreoviridin)，拧橡酸(citricacid)。

 

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、产品仅用于科研如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

 

四、使用范围

（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。

（2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。

（3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

 

五、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅胶保存法;磁珠保存法;麸皮保存法;纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

低温冰箱保存法(-20、-50或-85):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。

干冰保存法(-70左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。

液氮保存法(-196):是适用范围最广的微生物保存法。

 

六、注意事项

1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；

2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

 

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