微生物实验室常用消毒灭菌除菌器的使用与操作方法！

百欧博伟生物：微生物广泛存在于周围环境中，其中有些又是病原微生物，从预防感染出发，医务工作者必须严格执行无菌操作，对所用的物品和工作环境进行消毒灭菌，确保医疗与科研正常进行。

消毒灭菌主要是通过理化因素使微生物的主要代谢发生障碍，或菌体蛋白质变性凝固，或破坏其遗传物质，导致微生物死亡。这里主要介绍物理因素杀灭微生物的几种方法，以及相关器材的使用。

一、高压蒸汽灭菌器

1、构造：高压蒸汽灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚固厚实，其上方有金属厚盖，盖旁附有螺旋，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽压力升高，随着其温度亦相应地增高。

高压蒸汽灭菌器上装有排气阀门、安全活塞，以调节蒸汽压力。有温度计及压力表，以表示内部的温度和压力。灭菌器内装有带孔的金属搁板，用以放置要灭菌物体。

2、用法：加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。灭菌器下用煤气或电炉等加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，否则压力表上所示压力并非全部是蒸汽压力，灭菌将不完全。

待冷空气全部排出后（即水蒸气从排气阀中连续排出时），关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时(一般是101.53 kPa，即15磅/英寸2，温度为121.3)，调解炉火，保持压力和温度（注意压力不要过大，以免发生意外），维持15~30 min。灭菌时间到达后，停止加热，待压力降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突然打开排气阀门，以免灭菌器中液体喷出。

高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三：一湿热灭菌时菌体蛋白容易变性，二湿热穿透力强，三蒸气变成水时可放出大量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好的灭菌方法。凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、传染性污物等都可应用本法灭菌。

目前已出现全自动电热高压蒸汽灭菌器，操作简单，使用安全。

二、干热灭菌器(烤箱)

1、干热灭菌器是由双层铁板制成的方形金属箱，外壁内层装有隔热的石棉板。箱底下放置大型火炉，或在箱壁中装置电热线圈。内壁上有数个孔，供流通空气用。箱前有铁门及玻璃门，箱内有金属箱板架数层。电热烤箱的前下方装有温度调节器，可以保持所需的温度。

2、用法：将培养皿、吸管、试管等玻璃器材包装后放入箱内，闭门加热。当温度上升至160～170时，保持温度2 h，到达时间后，停止加热，待温度自然下降至40以下，方可开门取物，否则冷空气突然进入，易引起玻璃炸裂；且热空气外溢，往往会灼伤取物者的皮肤。一般吸管、试管、培养皿、凡士林、液体石蜡等均可用本法灭菌。

三、除菌滤器

除菌滤器简称滤菌器。种类很多，孔径非常小，能阻挡细菌通过。它们可用陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃屑等制成。下面介绍几种常用的滤菌器。

1、构造

赛氏(Seitz)滤菌器：由三部分组成。上部的金属圆筒，用以盛装将要滤过的液体；下部的金属托盘及漏斗，用以接受滤出的液体；上下两部分中间放石棉滤板，滤板按孔径大小可分为三种：K滤孔最大，供澄清液体之用；EK滤孔较小，供滤过除菌；EK-S滤孔更小，可阻止一部分较大的病毒通过。滤板依靠侧面附带的紧固螺旋拧紧固定。

玻璃滤菌器：由玻璃制成。滤板采用细玻璃砂在一定高温下加压制成。孔径由0.15～250 μm不等，分为G1、G2、G3、G4、G5、G6六种规格，后两种规格均能阻挡细菌通过。

薄膜滤菌器：由塑料制成。滤菌器薄膜采用优质纤维滤纸，用一定工艺加压制成。孔径：200 nm，能阻挡细菌通过。

2、用法：将清洁的滤菌器(赛氏滤菌器和薄膜滤菌器须先将石棉板或滤菌薄膜放好，拧牢螺旋)和滤瓶分别用纸或布包装好，用高压蒸汽灭菌器灭菌。再以无菌操作把滤菌器与滤瓶装好，并使滤瓶的侧管与缓冲瓶相连，再使缓冲瓶与抽气机相连。

将待滤液体倒入滤菌器内，开动抽气机使滤瓶中压力减低，滤液则徐徐流入滤瓶中。滤毕，迅速按无菌操作将滤瓶中的滤液放到无菌容器内保存。滤器经高压灭菌后，洗净备用。 　　

3、用途：用于除去混杂在不耐热液体（如血清、腹水、糖溶液、某些药物等）中的细菌。

四、紫外线灯的使用

紫外线中波长为240～280 nm者具有杀菌能力，其中265～266 nm的杀菌作用最强。医学上常使用紫外线灯产生紫外线进行消毒灭菌。常用的是水银灯，灯管由石英玻璃制成，管内充满压强为266 Pa的氩和几滴水银。

其杀菌作用主要是因为DNA吸收了紫外线引起胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰了DNA的复制，轻则发生突变，重则导致死亡。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透力弱，不能透过普通玻璃和有色纸张，因此，只适用于直接照射的物体表面消毒或空气消毒。

使用方法：将涂有细菌的平皿放置在距紫外线60～100 cm处，直接受紫外线照射30 min后，37孵育24h后观察生长情况。

结果：紫外灯管直接照射处无菌生长，如用玻璃和黑纸遮盖，则有菌生长。

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