分光光度计的吸光度，为何要控制在1以内？

百欧博伟生物：分光光度计的原理就是根据朗伯-比尔定律，我们简单点来说，就是不同浓度的样品有不同的吸光度，吸光度和样品浓度成函数关系，根据这种关系，我们就能够测出未知量的浓度。

分光光度计根据波长不同主要是分为三种:紫外分光光度计、可见分光光度计、和近红外分光光度计。我们今天主要说紫外可见分光光度计。

A段（190-340）nm、B段（340-900）nm、C段（900-2600）nm由下图可知，分光光度计可分为四个等级，我们常用的一般都是或级。

紫外区主要是氘灯，氘灯提供的光源在(180～375)nm，关于氘灯的寿命大概在1000小时左右，可见区主要是用的钨灯，钨灯提供的光源在(320～2500)nm，钨灯就是我们小时候用的电灯泡，寿命的话比氘灯要长点，具体仪器得具体分析了（1000-2000）h左右。

大家需要注意的是不同的光区，使用不同的吸收池，紫外区用的是石英吸收池，可见区用的是玻璃吸收池。不容易被磨损的，就是石英吸收池。还有一种比较容易的办法，就是石英吸收池和玻璃吸收池，在紫外区有不同的吸光度，在250nm波长时，如果吸光度＜0.07Abs的就是石英吸收池。

吸光度的范围：由于分光光度计原理是根据朗伯-比尔定律，我们做样品时，尽可能的将吸光度控制在1以内，具体原因有兴趣的可以去计算。

A=lg(1/T)=Kbc

A为吸光度,T为透射比(透光度),是出射光强度（I）比入射光强度(I0).

K为摩尔吸光系数.它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关.

c为吸光物质的浓度,单位为mol/L，b为吸收层厚度，单位为cm

关于分光光度计预热时间，一般要求在20min左右。这个也很好理解，就是小时候那种家用灯泡，刚开启时没有那么亮，等段时间后会慢慢变亮。稳定后，我们做样品才能稳定可靠。

透射比和吸光度的换算：分光光度计上就这两个测量量，透射比和吸光度什么关系呢？吸光度 = -log(透射比)。

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