易变链霉菌的明胶作用及培养方法与实验内容！

易变链霉菌，属放线菌，孢子椭圆形、长圆形、表面光滑。对革兰氏阳性细菌、酵母、丝状真菌抑制作用弱。

一、菌种简介

平台编号：Bio-00858

规格：冻干粉

拉丁属名：Streptomyces Mutabilis

中文译名：易变链霉菌

拉丁学名：Streptomyces mutabilis

原始编号：174017

菌株来源：←河北大学

保藏人：张利平

直接来源国家：中国

保藏时间：9/3/2008

生物危害：四类

模式菌株：非模式菌株

菌株用途：研究

培养温度：28

培养基：0012    

分离源：灌木下土壤

采集地点：湖北省武汉磨山

采集国家：中国

提供形式：冻干物

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、菌株性质

高氏合成1号琼脂：气丝灰色或暗灰色，粉状或绒状。基丝微绿色或绿褐色，日久变为褐紫色。可溶色素初微绿色 、后污紫色。甘油天冬素琼脂(ISP)、无机盐淀粉琼脂 (ISP)、酵母精麦芽精琼脂(ISP)、燕麦粉琼脂(ISP)：气丝灰色或白色。基丝反面无鉴别色素，色素非pH指示剂。可溶色素无，只在第三种培养基内有迹量黄色或绿黄色，对pH不敏感。高氏有机2号琼脂：气丝少，浅灰色或黄灰色。基丝黄褐色。可溶色素绿褐色。马铃薯块：气丝暗灰色。基丝好，黄绿色或绿褐色。可溶色素绿褐色。

三、明胶作用

明胶液化7天弱，20—25天完全，绿褐色素。牛奶凝固并缓慢胨化，微粉色素。淀粉水解弱或无。纤维素上生长。 硝酸盐不还原。不产生类黑色素、酪氨酸酶和H2S。利用 D-葡萄糖、L-阿拉伯糖D-木糖、D-果糖、鼠李糖、肌醇、D-甘露醇；在蔗糖上略有生长；不利用棉子糖。对革兰氏阳性细菌、酵母、丝状真菌抑制作用弱。

四、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。

6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

五、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

六、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

（1）蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

（2）糖液保存法：适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅胶保存法;磁珠保存法;麸皮保存法;纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

低温冰箱保存法(-20、-50或-85)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。

干冰保存法(-70左右)：即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。

液氮保存法(-196)：是适用范围最广的微生物保存法。