小鼠纤维肉瘤细胞的复苏与传代及冻存操作说明！

MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞是一种弱免疫原性的细胞系，由纤维肉瘤在C57BL/6小鼠中诱导产生。这种细胞系已被广泛用于诱导肿瘤反应性T淋巴细胞的过继免疫疗法研究中。同时，MCA-205细胞也被用作刺激剂，以研究细胞因子的表达。此外，该细胞系还是研究肿瘤细胞免疫反应和支持靶向癌症免疫疗法开发的绝佳模型。

一、细胞简介

平台编号：Bio-133490

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：MCA-205

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

产品类别：小鼠细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：1640+10S

细胞形态：梭形，常有大小粗细不等的胞突

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

1）组织来源于实验动物的正常肉瘤组织。

2）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

3）细胞生长方式：悬浮培养。

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。

5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。

四、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核

五、细胞收到后处理

培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）

六、细胞培养步骤

a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

3、轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。

4、将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；

3、弃上清，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。

4、将冻存细胞直接放入-80冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

C、细胞复苏：

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37,5%CO2细胞培养箱中培养；

4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。