重组人超氧化物歧化酶的特点与生产方法！

重组人超氧化物歧化酶是一种广泛存在于生物体内，能清理生物体内的超氧阴离子自由基(O2-)，维持机体中自由基产生和清理动态平衡的一种金属酶。

一、特点

重组人超氧化物歧化酶与人体内天然存在的SOD序列相同，具有更高的人体亲和力。

二、生产方法

市场上流通的SOD大多是从动物血液中提取的，容易受到污染，产生细菌内毒素，引起热源性问题，研制开发重组人超氧化物歧化酶不仅可解决人源SOD来源有限和因血制品污染而带来的安全性问题，而且可避免异源SOD在临床应用时可能出现的免疫性过敏反应。传统的SOD纯化方法较繁琐且费时费力，SOD产率较低、生产成本昂贵，不利于大规模的工厂化生产。因此开发其他更安全、更经济的提取或分离方法取代传统SOD生产方法具有十分重要的意义。本发明将含有人源SOD基因的工程菌进行发酵表达，高压匀质破碎后进行热变性，离心超滤后进行层析，克服了以现有技术存在的缺陷，可满足工业化生产的需要。

本发明涉及一种重组人源超氧化物歧化酶的生产方法。属于生物工程技术领域。该方法利用铜盐热变性除去大部分杂蛋白，离心后经过微滤除菌及杂质，利用超滤进行浓缩、除盐及小分子杂蛋白，阴离子层析纯化后，冷冻干燥。操作简单，成本低廉，适用于工业生产。

具体操作步骤为：

(1)将含有人源超氧化物歧化酶基因的大肠杆菌进行发酵，发酵液用管式离心机离心，转速：16000r/min，流速：0.6-0.8mL/min，收集菌体，按照菌体湿重与纯水体积110比例悬浮，用高压匀质机破碎，破碎压力为880bar，破碎一次；

(2)在破碎后混合液中加入2％-6％体积的10mmol/L的CuCl2溶液，通入螺旋管加热器中进行热变性，热变性温度65-80，时间：10-30min。离心，收集上清；

(3)膜处理，将步骤2所得上清液依次通过5μm的预处理膜、0.22μm滤膜、6kDa超滤膜；

(4)DEAE-SephadexA50柱层析，用2.5-50mmoL/L的pH 7.6的磷酸钾盐缓冲液进行 梯度洗脱，收集具有SOD活力的洗脱液，超滤浓缩后，冷冻干燥，用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性。