导致蛋白免疫印迹实验检测无信号的原因有哪些？

蛋白免疫印迹（ Western Blot，WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB 是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。

蛋白免疫印迹实验出现检测无信号结果原因分析汇总如下：

主要可能由于以下原因导致：

1、用于检测的二抗不匹配。解决办法：需要确定一抗的宿主。

2、一抗二抗的浓度过低：需要耐心地重新实验。

3、一抗不识别被检测物种中的蛋白质：可以再检查以下一抗的特异性。

4、凝胶上上样的蛋白量太少：凝胶上样品过少也会导致信号弱，所以适当增加样本量也可以防止此现象发生。

5、传输效率相当低：出现这种情况可以尝试修改转移程序的操作，确保 PVDF 与甲醇预孵育。转移后干燥 PVDF 以确保蛋白质与疏水膜的结合。

6、一抗使用次数过多：亿康如果过度稀释对信号检测也会有一定的影响，所以尽量使用新稀释的一抗。

7、阻塞时间过长或洗涤次数过多：尽量减少阻塞时间和洗涤时间。

8、检测试剂盒不起作用：这种情况出现的较少，实验中注意试剂盒的有效期是否正常，也可使用阳性对照并确保检测试剂盒正常工作。

9、叠氮化钠可能会抑制二抗：尽量避免在稀释缓冲液中使用叠氮化钠。

10、一抗或二抗的孵育时间太短：可适当延长孵化时间

11、SDS 上样缓冲液和样品裂解液没有充分混合或者混合不均匀：SDS 上样缓冲液需要随用随配，以保证其新鲜度，另外缓冲液与裂解液可以使用涡旋混合器进行充分混合。

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