人抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)ELISA试剂盒的应用！

 

一、背景

 

人抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中抗可提取核抗原抗体(ENA-AB)的含量。

 

二、实验原理

 

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

 

三、样本处理及要求

 

1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

 

2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

 

3、细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20或-80保存，但应避免反复冻融。

 

四、操作步骤

 

1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4。

 

2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

 

3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

 

4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37水浴锅或恒温箱温育60min。

 

5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

 

6、每孔加入底物A、B各50μL，37避光孵育15min。

 

7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

五、实验结果计算

 

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

 

六、应用

 

用于系统性红斑狼疮合并肺血栓栓塞症的临床特点研究：

 

分析系统性红斑狼疮合并肺血栓栓塞症患者的临床特点。

 

方法：筛选诊断为SLE合并PTE患者42例,以等距抽样的方式选择同期住院的诊断为SLE且未合并PTE的患者243例,详细记录患者的临床资料及治疗预后情况,回顾性总结分析两组的临床特点。

 

结果：

 

1、SLE合并PTE组42例,男性4例,女性38例,男:女为1.00:9.50,平均年龄45.52±13.25岁;SLE组243例,男性24例,女性219例,男:女为1.00:9.13,平均年龄40.53±12.96岁;SLE合并PTE组年龄明显高于SLE组（t=2.300,P=0.022）,SLE合并PTE的好发年龄为50岁-60岁;SLE患者起病年龄≥50岁时更易合并PTE;两组的民族及性别无统计学差异。

 

2、SLE病程在1年内更容易发生PTE（Z=-2.500,P=0.012）。

 

3、SLE合并PTE组疾病活动性高于SLE组（Z=-2.896,P=0.004）。

 

4、SLE合并PTE组入院首发症状中呼吸系统表现（呼吸困难、胸痛、咯血）阳性多于SLE组;也更易出现下肢表现（下肢肿胀、疼痛）。

 

5、SLE合并PTE组白细胞、中性粒细胞绝对值、尿酸、胆固醇、APTT、D-二聚体比SLE组高（Z=-2.904,P=0.004、Z=-3.805,P=0.000、Z=-2.033,P=0.042、t=2.089,P=0.042、Z=-2.201,P=0.028、Z=-3.994,P=0.000）;白蛋白比SLE组低（t=-2.168,P=0.031）;在尿常规检查中,SLE合并PTE组蛋白尿阳性的患者较SLE组多。淋巴细胞绝对值、血红蛋白、血小板、球蛋白、肌酐、肌酸激酶、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿红细胞、尿白细胞、尿管型无统计学意义。

 

6、SLE合并PTE组ESR、CRP较SLE组高（t=2.210,P=0.028、Z=-5.878,P=0.000）。

 

7、SLE合并PTE组IgG较SLE组低（Z=-1.990,P=0.047）,补体（C3、C4）、免疫球蛋白（IgA、IgM）、dsDNA、aCL、ANCA、ANA、可提取核抗原抗体（ENA-Ab Sm、ENA-Ab U1RNP、ENA-Ab SSA、ENA-Ab SSB、ENA-Ab JO-1、ENA-Ab Rib、ENA-Ab SCL-70）无统计学意义。

 

8、SLE合并PTE组肺动脉高压、肺动脉增宽、胸腔积液、心包积液、下肢血栓、感染、高血压和继发性抗磷脂综合征的发生率比SLE组高。

 

9、SLE患者入院前服用激素剂量对发生PTE有影响（Z=-2.138,P=0.032）。

 

10、SLE合并PTE组住院时间较SLE组长（Z=-3.107,P=0.002）。

 

11、SLE患者在不同治疗措施下发生PTE的时间无明显差异（F=1.608,P=0.216）。

 

12、使用Logistic回归分析发现年龄、SLEDAI评分、白细胞、CRP、APTT、D-二聚体是SLE合并PTE的危险因素。

 

结论：

 

1、年龄较大、病程在1年内、疾病重度活动的SLE患者易发生PTE。

 

2、合并肺动脉增宽、肺动脉高压、胸腔积液、心包积液、下肢血栓、高血压、感染、继发性抗磷脂综合征的SLE患者易发生PTE。

 

3、年龄、SLEDAI评分、白细胞、CRP、APTT、D-二聚体为SLE患者发生PTE的危险因素。