荧光PCR检测试剂盒的操作流程与检测方法！

荧光PCR检测试剂盒采用荧光PCR技术，通过荧光信号的变化检测犬线粒体基因的特异性序列。该试剂盒适用于鉴定多种样本中是否含有犬源性基因成份。

作用原理：所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

荧光PCR检测试剂盒具体的操作流程：

1、整个检测过程应严格按照本手册的要求在试剂制备区、样品处理区和PCR扩增区进行。各区域的实验服、仪器和耗材应单独使用，不得混用；实验中采用了带滤芯的吸头；样品处理区应配备生物安全柜，在其中进行样品处理；三个区域应配备紫外线消毒装置。

2、为避免RNA降解，样品处理过程应在0-4下进行，实验完成后应立即进行计算机检测；样品处理中使用的仪器和耗材应在不含核酶的情况下进行处理。

3、应为每个实验设置阴性和阳性对照。

4、试剂盒中的所有试剂在使用前应在室温下充分熔化和混合，并应立即离心。

5、试剂盒中的所有阴性和阳性对照品应转移到样品制备区，并在使用前单独储存。

6、为了防止荧光干扰，必须避免徒手直接接触PCR反应管，并避免PCR反应管上的任何标记。

7、仪表放大的相关参数应根据本手册的相关要求进行设置；不同批号的试剂不能混合。

8、在实验过程中，产品废弃物应在丢弃前进行无害化处理。

荧光PCR检测试剂盒检测方法的局限性有什么？

1、样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2、样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3、阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4、病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5、不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6、试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7、本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

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