RKO-E6人结肠癌转基因细胞的培养操作步骤！

RKO-E6人结肠癌转基因细胞的简介

RKO-E6细胞系是用脂质体法转染pCMV-E6的结肠癌RKO细胞系。该细胞含有稳定整合受控于巨细胞病毒启动子的人乳头状病毒（HPV）E6癌基因。 RKO-E6细胞系和它的母系RKO一起可用于研究p53缺失引起的细胞参数改变p53介导的转录和凋亡等。

动物种别：人

性别：未知

组织来源：结肠癌，转染插入到pCMV中的HPV E6

形态：上皮细胞

RKO-E6人结肠癌转基因细胞培养步骤

细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，后放入37，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20 1.5h，然后将其移入-80过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80。

细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。