Super Tube（狗肾细胞）的性质与用途及生产工艺！

一、细胞简介

平台编号：Bio-73414

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：Super Tube

细胞名称：Super Tube（狗肾细胞）

种属：狗

年龄（性别）：雌；成年

组织来源：正常肾

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：从表观正常的成年雌性可卡犬中建立了细胞株MDCK，从中克隆建立了狗上皮样细胞株Super Tube细胞。当维持高细胞浓度时，Super Tube细胞形成大量的小管(据报道，24孔板的每孔铺7×10^5细胞，3天内就能形成小管)。要形成小管，Super Tube细胞需要每天两次换液以提供足够养分。与原始细胞株相比，Super Tube细胞的c-AMP的检测水平低得多，在毛喉素刺激下读出的腺苷环化酶水平也低；Super Tube细胞的跨上皮抗性也比Super Dome和MDCK都低。

生长培养基：DMEM高糖＋0.05mM NEAA＋10% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞用途

狗肾细胞是从一只外观正常的成年雌性英国小猎犬的肾分离等到MDCK细胞株。角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性。MDCK被用于研究β-粥样蛋白前体的处理及其蛋白水解产物。

三、操作说明

1)对于常温运输的细胞，收到细胞后，检查是否有运输问题，即细胞培养瓶或管是否破损，细胞培养液是否溢出。若没有运输问题，请75%酒精消毒后，保留封口膜，放入细胞培养箱中静置。严格检查培养箱的参数：温度，湿度和CO2浓度。细胞静置时间一般为6-12小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。选用正确的细胞培养体系，A2780(人卵巢癌细胞)严格按照说明书的培养条件进行培养。条件允许，培养的前三天内做细胞拍照记录，通过邮件发送给我们做及时状态跟踪。

2)对于干冰运输的细胞，请取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。然后将其复苏培养，次日更换培养液。

四、应用

用于犬细小病毒YBYJ株全基因组克隆及其诱导MDCK细胞凋亡的初步研究：

首先根据GeneBank中已发表的CPV序列设计7对引物,对CPV YBYJ株全基因组分段扩增,克隆和测序,用DNAstar对测序结果拼接,其全基因组包含5 051个核苷酸。

与GeneBank中发表的其它犬细小病毒毒株进行分子遗传进化学分析,结果表明,CPV YBYJ株与亚洲地区的毒株的亲缘关系最近,YBYJ株与CPV,SICHUAN（MH476590）的同源性最高,为99%。与GeneBank中发表的其它细小病毒毒株进行分子遗传进化学分析,结果表明,CPVYBYJ株与猫细小病毒（FPV）的亲缘关系最近,基因组同源性是98.6%,与马细小病毒（EqPV）的亲缘关系最远,基因组同源性仅为35.1%。

本试验应用CPV YBYJ强毒株在体外感染MDCK宿主细胞,通过光学显微镜和荧光倒置显微镜观察到MDCK细胞被CPV感染后出现变圆、坏死和脱落等典型的细胞病变效应（CPE）。随着CPV感染时间延长,细胞活性逐渐降低,具有一定的时间依赖性。

本试验成功建立CPV感染MDCK宿主细胞模型。通过细胞凋亡一DNA Ladder抽提试剂盒抽提CPV感染MDCK细胞的总DNA。琼脂糖凝胶电泳结果显示明显的DNA Ladder。荧光显微镜下用双色滤光片观察Annexin V-FITC/PI双染法染色的样品,CPV感染48 h时,检测孔内有较多细胞呈现明亮的苹果绿色,部分细胞呈现绿色胞膜包裹着红色的胞核。

分别提取CPV诱导12 h,24 h,36h,48h和60h时MDCK细胞的蛋白,使用酶标仪确定Caspase-3相对活性,Caspase-3活性随着时间延长先升高后降低,并在48 h时达到峰值（p<0.01）。但随着时间继续延长,凋亡作用活性检测指标逐渐减弱。试验结果说明,CPV YBYJ强毒株在体外可以诱导MDCK宿主细胞发生凋亡,诱导作用在感染48 h时最明显,之后随着诱导时间延长,细胞趋于晚期凋亡并且坏死。