小鼠结肠上皮L细胞的作用与培养及注意事项！

一、背景

上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。

二、产品信息

平台编号：Bio-131287

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：小鼠结肠上皮L细胞

细胞名称：小鼠结肠上皮L细胞

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6；1x10^6

保存温度：37；-198

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途限制：仅供科研3类

培养体系：DMEM高糖培养基+10S+1%双抗

培养温度：37

二氧化碳浓度：5%

简介：小鼠结肠上皮L细胞取自ICR小鼠结肠组织，可连续传代，梭形。

注释：倍增时间45h

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、主要作用

小鼠结肠上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，小鼠结肠上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在粘膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。小鼠结肠上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在粘膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定粘膜免疫反应的发生、性质和强度。

四、培养操作

1)复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  

3.按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为类;

1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

（1）小鼠小肠上皮细胞研究的对象是活细胞

在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

（2）研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。

（3）研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

（4）研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

（5）研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、学、生物化学、遗传学、分子生物学等;

适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。

（6）研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

五、验收细胞注意事项

1、收到小鼠结肠上皮L细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。

2、收到小鼠结肠上皮L细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。

3、收到小鼠结肠上皮L细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。

4、收到小鼠结肠上皮L细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

5、将培养瓶置于37培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4冰箱，以备不时之需。

6、24小时后，小鼠结肠上皮L细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。

7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37，5%CO2培养。

特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。