鼠胰岛素瘤胰岛A细胞的性质、用途及生产工艺！

一、细胞简介

平台编号：Bio-133634

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：AlphaTC1clone6

细胞名称：alphaTC1clone6鼠胰岛素瘤胰岛a细胞

产品类别：人源细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM（高糖）+10S

传代方法：1：2传代

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：无血清细胞冻存液

保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞传代

1、细胞密度约 80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2~3 ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉胰酶，加 3~4ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4、注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。

三、细胞复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。*天换液并检查细胞密度。

四、细胞冻存

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例;

1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

五、注意事项

1、细胞签收后，请尽快确认细胞状态（平放静置半小时后镜下查看）。若细胞状态不佳，请当天尽快拍照反馈，以便实验室及时售后跟踪处理。细胞签收后若未及时联系，视为默认细胞状态正常。

2、收到细胞后请尽快更换于我司订购的配套完全培养基，或自己配置的新鲜培养基（含 15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）。

3、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育过夜到第二天再做消化传代。若签收的细胞密度较高，可及时拍照反馈，实验室会根据细胞实际情况给予操作建议。

4、细胞具有密度依赖性,首次传代（密度 80%），建议 1：2 传代（保持细胞密度），且优先选择d=6cm 的培养皿。

5、关于双抗，本实验室在细胞培养过程中不添加双抗，用户可根据自己实验室具体情况选择添加双抗（100U/ml 青霉素＋100U/ml 链霉素）。《PS 本实验室自主研发的抗生素，可有效效清除广大实验室普发的黑胶虫，支原体，细菌，真菌等污染，如有需求，请咨询销售人员。》