实验室微生物无菌操作的注意事项有哪些？

无菌技术主要包括

1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒;

2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;

3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行，

4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触

一、倒平板

1、培养基灭菌后，需冷却至50左右时才能倒平板。

2、左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。

3、整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

4、平板冷却后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。

5、若倒平板时，培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板应丢弃。

二、平板划线操作

第一次划线及每次划线之前都要灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的总结如下表：

1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红;2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞;

3、将试管口通过火焰;4、将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液;

4、将试管口通过火焰，并塞上棉塞;6、左手将皿盖打开条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。

7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一-区域的划线与第一-区相连。8、将平板倒置，放入培养箱中培养。

三、稀释涂布平板

1、稀释操作时：

每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1－2cm处。

2、涂布平板时：

涂布器用70％酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。

不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何物体。

三、摆斜面

装在试管中的琼脂培养基，在灭菌完成后，趁热立即摆放在木棒（或玻璃棒）上，并成适当的斜度，冷却后，琼脂凝固即成斜面。斜面长度不用超过试管二分之一。

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