NCI-H82人小细胞肺癌细胞的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

平台编号：Bio-129551

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：NCI-H82

细胞名称：人小细胞肺癌细胞NCI-H82

用途：STR鉴定正确

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞描述

原始肿瘤的形态学不符合小细胞肺癌（SCLC）的特征。该细胞系在生化和形态学上是SCLC的变种，表达神经元特异性烯醇酶和肌酸激酶的脑同工酶。它的L-DOPA脱羧酶或蛙皮素的表达量未达到可检测水平。该细胞产生一个异常大小的p53 mRNA（3.7 kb）。该细胞的C-myc DNA序列扩增约25倍，c-myc RNA比正常细胞增加24倍。据报道该细胞表达功能性ANP受体，但用ANP处理不会改变其生长方式。该细胞的神经丝和波形蛋白染色呈阳性，表达v-fes，v-fms，Ha-ras，Ki-ras，N-ras和c-raf 1 mRNA。

三、经本库STR检测无误，STR鉴定结果为：

Amelogenin: X ,CSF1PO: 11,11, D13S317: 8,8, D16S539: 12,12,D5S818: 12,12,

D7S820: 10,13,TH01: 9,9.3,TPOX: 11,11,vWA: 14,14

四、细胞特性

1）来源：人  来源于转移灶：胸腔积液

2）含量：>1x106  细胞数

3）形态：上皮样、悬浮成团

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

五、细胞的运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

六、细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）悬浮细胞：T25瓶置于37培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                      

七、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基         87%

优质胎牛血清                   10%

GlutaMAX-1谷氨酰胺             1%

Sodium Pyruvate丙酮酸钠        1%

P/S青霉素-链霉素               1%

备注：nci-h82 细胞悬浮聚集体，细胞以非常大的聚集体生长，聚集体是唯一的活细胞群

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

下面T25瓶为例；

1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。