丙酮丁醇梭菌的储存与培养条件及注意事项！

丙酮丁醇梭菌一种属于梭菌属的革兰氏染色阳性、细胞呈梭状、能产生丙酮和丁醇等溶剂的厌氧芽孢杆菌，是专性厌氧菌，不含SOD酶和过氧化物酶。细胞大小0.6～0.9μm×2.4～4.7μm，常含细菌淀粉粒。以周生鞭毛运动。芽孢卵圆形，次端生。表面菌落圆形、凸起，直径 3～5mm，边缘不规则，色灰白，半透明，表面有光泽。

一、菌种简介

平台编号：Bio-67322

提供形式：冻干物

拉丁属名：Clostridium Acetobutylicum

中文名称：丙酮丁醇梭菌

属名：Clostridium

种名加词：acetobutylicum

其它中心编号：=NRRL 824

来源历史：←上海溶剂厂←美国 NRRL

收藏时间：1956.00.00

资源归类编码：15131711101

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

特征特性：G+，菌体杆状，运动。菌落圆形，表面粗糙，隆起，边缘基本整齐，白色。液体培养有丙酮丁醇、丁酸味，有沉落物。明胶液化，不产色素。发酵葡萄糖、蔗糖和淀粉。接触酶阳性，牛奶反应不产酸、不凝固、胨化、不完全还原，利用硝酸盐。最高生长温度39，最低生长温度32。产丙酮丁醇。

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养基：（1）全玉米粉加水调成糊，倒入沸水中，使其浓度为5%，不断搅拌，煮1h。分装于已灭菌的试管中，1.5kg/cm2 压力下灭菌90min（代替巴氏灭菌）（2）冷却后接种。（3）接种后将试管放入沸水浴中热处理1～2min。（4）将试管立即在冷水中冷却，揩干试管。（5）37厌氧培养7～10天，如糊化液全部液化，顶盖浮在上面，下部有云带，即表明生长良好，可作为种子，按上述步骤再传一代，即可扩大培养。

培养温度：37

资源保藏类型：培养物

保存方法：真空冷冻干燥法

实物状态：有实物

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：研究；生产；

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 2-8冷藏。西林瓶菌种请置于-20冷冻。

三、培养条件

1、培养基编号：CM0162

2、培养基成分：（1）全玉米粉加水调成糊，倒入沸水中，使其浓度为 5%，不断搅拌，煮1h。分装于已灭菌的试管中，1.5kg/cm2 压力下灭菌 90min。（代替巴氏灭菌）（2）冷却后接种。（3）接种后将试管放入沸水浴中热处理 1～2min。（4）将试管立即在冷水中冷却，揩干试管。（5）37厌氧培养 7～10 天，如糊化液全部液化，顶盖浮在上面，下部有云带，即表明生长良好，可作为种子，按上述步骤再传一代，即可扩大培养。

3、需氧类型：厌氧

4、培养温度：37

四、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

五、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。

4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。

5、暂不启开的安瓿管应于 4中保藏（特殊除外）。冻干管打开后需一次用完，不能留存。

7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。