恶臭假单胞菌（带绿色荧光）的活化表达方法！

恶臭假单胞菌，革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。专性需氧，最适生长温度25~30，42不生长，4生长不定，菌落与铜绿假单胞菌相似，但只产生荧光素（青脓素），不产生绿脓素，借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥臭味。常见于双胞蘑菇的黄斑病害，是其主要致病因素之一，危害较大。

一、菌种简介

平台编号：Bio-109152

规格：2ml甘油菌

拉丁属名：Pseudomonas Putida

菌株名称：恶臭假单胞菌（带绿色荧光）

用途：恶臭假单胞菌（带绿色荧光）

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、荧光蛋白恶臭假单胞菌活化表达方法

1、收到菌种后首先在庆大霉素（终浓度50微克每毫升）固体营养平板上进行划线，30度培养箱中培养至单菌落生成（约16-20小时）

2、挑取单菌落于装有5mL LB（含庆大霉素（终浓度50微克每毫升）） 液体的试管中，30度摇床，200转摇至菌浓（约16小时）

3、转接1 mL菌液于50mL LB（含庆大霉素（终浓度50微克每毫升））液体的摇瓶中，30度摇床，200转摇至OD600=0.1-0.3（约2.5小时），加入IPTG(终浓度0.5mM/mL)并置于30度摇床中培养10-16小时

4、一切操作及试剂均保证无菌

5、最终摇瓶中应呈现肉眼可见的颜色（诱导后12小时-16小时）

三、耐药性

恶臭假单胞菌为无芽胞革兰阴性需氧细长杆菌，属假单胞菌属，一般认为是鱼类的一种病原菌及环境污染菌，对人体是一种少见的机会致病菌，未引起临床重视。但随着抗菌药物的广泛应用，此菌耐药性上升，当患者出现菌群失调、宿主免疫力低下或创伤后等情况时，导致其感染率上升。有研究在233株非发酵菌中，恶臭假单胞菌检出48株，达20.6％，尿中检出率也较高，常因表现为难治性感染时被临床发现。

四、临床表现

从患者年龄看，以老年患者占同期检出假单胞菌属细菌百分率较高，基础疾病以终未期肾病检出恶臭假单胞菌占同期同类基础疾病检出的假单胞菌属细菌百分率最高，其次为严重软组织损伤、呼吸道慢性疾病伴有呼吸功能受损和再生障碍性贫血等免疫机能受损的患者，提示恶臭假单胞菌作为条伴致病菌，致病力弱，其感染多见于老年患者，主要是有侵入性操作伴有基础疾病的免疫机能低下患者，应引起临床注意。

五、临床意义

恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）为鱼的一种致病菌，常从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正常菌群，是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味。

六、微生物学检验

鉴定中注意与其他假单胞菌相区别，只产生荧光素不产生绿脓素，42不生长可与铜绿假单胞菌区别；不液化明胶、不产生卵磷酯酶、陈旧培养物上有腥臭味，有别于荧光假单胞菌。