人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的背景与应用！

一、背景

人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞源于手术取得的患类风湿性关节炎病人的关节滑膜组织，纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性，经鉴定细胞纯度高于90%。不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

滑膜是关节囊的内层，淡红色，平滑闪光，薄而柔润，由疏松结缔组织组成。关节腔内的所有结构，除关节软骨、半月软骨板以外,即便是通过关节腔的肌腱、韧带等均全部为滑膜所包裹。

滑膜分泌滑液，在关节活动中起重要作用。正常滑膜分为两层，即薄的细胞层(内腔层)和血管层(内膜下层)，是血管丰富的关节囊内膜，贴附于非关节面部分，覆盖于关节囊内的骨面上，不在软骨面上，此部分称为边缘区或“裸区”。滑膜呈粉红色，光滑发亮、湿而润滑，有时可见绒毛，内含胶原性纤维。

滑膜细胞有A、B两型。巨噬细胞样A型细胞，表面有丝状伪足、浆膜内陷、囊泡、线粒体、溶酶体、胞浆纤维和高尔基体，具有吞噬功能；B型成纤维样滑膜细胞(FLS)，有高浓度的内质网结构，是介导RA关节破坏的主要细胞。

二、应用

用于人脐带间充质干细胞微泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞自噬水平影响的研究：

研究hUCMSC-MVs对RA-FLSs的自噬水平是否具有调节作用,探究hUCMSC-MVs作用于RA的机制。

方法：购买hUCMSCs细胞系（SM-MSC）和RA-FLSs细胞系（MH7A）,培养传代后用于实验。梯度离心法提取hUCMSC-MVs,透射电镜鉴定形态及Western Blot法鉴定其表面抗原表型。

实验分为RA-FLSs组（空白对照组）、自噬抑制剂干预RA-FLSs组（3-MA干预组）、hUCMSC-MVs干预RA-FLSs组（hUCMSC-MVs干预组）。

实验主要方法包括CCK8法测细胞增殖,流式细胞术测细胞凋亡,划痕实验法测细胞迁移,RT-qPCR法检测自噬相关基因BECN1、MAP1LC3B mRNA表达,Western Blot法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达及LC3/比值。

结果：hUCMSC-MVs对RA-FLSs增殖、凋亡及迁移能力的影响

（1）细胞增殖：与空白对照组相比,10μg/mL MVs干预组、50μg/mL MVs干预组、100μg/mL MVs干预组细胞存活率均极显著增加（P<0.001）;

与空白对照组相比,3-MA干预组、150μg/mL MVs干预组、200μg/mL MVs干预组存活率均极显著降低（P<0.001）;150μg/mL MVs干预组与200μg/mL MVs干预组相比无显著差异（P>0.05）;

150μg/mL MVs干预组存活率与3-MA干预组相比差异不显著（P>0.05）。

（2）细胞凋亡：与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组细胞凋亡率极显著增加（P<0.01）;hUCMSC-MVs组与3-MA组相比差异不显著（P>0.05）。

（3）细胞迁移能力：干预12h和24h后,与空白对照组相比,3-MA干预组、hUCMSC-MVs干预组细胞迁移率极显著降低（P<0.01）;hUCMSC-MVs干预组与3-MA干预组迁移率相比差异不显著（P>0.05）;干预48h后,与空白对照组相比,3-MA干预组和hUCMSC-MVs干预组均无统计学差异（P>0.05）。