少孢酵母的培养方法与注意事项及打管说明！

少孢酵母是Saccharomyces属的微生物，原产地为中国。白色至奶油色的奶油样菌落，营养体细胞出芽生殖，有简单的假菌丝。形成子囊孢子，每个子囊最多包含4个表面光滑的椭圆形或圆形子囊孢子。主要用途为研究，具体用途为近海酵母。

一、菌种简介

平台编号：Bio-57376

提供形式：冻干物

拉丁属名：Saccharomyces Exiguus

中文名称：少孢酵母

属名：Saccharomyces

种名加词：exiguus

来源历史：←上海工业试验所←金培松

收藏时间：1953.00.00

资源归类编码：15151113126

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

具体用途：麻发酵菌群之一

特征特性：发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖；不发酵麦芽糖、棉子糖、乳糖；同化木糖、赤藓糖醇。    

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。

培养温度：28-30

资源保藏类型：培养物

保存方法：-80冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

实物状态：有实物

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：研究；生产；麻发酵菌群之一

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 2-8冷藏。西林瓶菌种请置于-20冷冻。

三、培养条件

1、培养基编号：CM0077

2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然 pH。

3、需氧类型：好氧

4、培养温度：28-30

四、培养方法

1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤：

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。

五、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。

六、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。

4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。

5、暂不启开的安瓿管应于 4中保藏（特殊除外）。

6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。

7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。