TRAMP-C2小鼠前列腺癌细胞的培养操作步骤！

一、产品信息

平台编号：Bio-133873

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：TRAMP-C2

细胞名称：小鼠前列腺癌细胞

培养条件：DMEM+10S，37，5%CO2，

冻存条件：90S+10%DMSO。

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞简介

小鼠前列腺癌细胞分离自小鼠源前列腺癌的上皮细胞样贴壁细胞，主要用于RM-1(RM1)小鼠前列腺癌细胞的体外研究。小鼠前列腺癌细胞支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。

三、细胞特性

来源：小鼠

形态：成纤维样贴壁生长

含量：>1x106细胞数

规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

用途：仅供科研使用。

四、培养基及培养冻存条件准备

1）准备DMEM基础培养基；胎牛血清，10%1%p/s。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

五、细胞处理

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%，即可进行传代培养。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10S的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

下面T25瓶为类；

1、细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

2、4min，1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。