人雪旺细胞永生化的使用方法与培养操作步骤！

一、细胞简介

平台编号：Bio-132557

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：永生化细胞

细胞名称：人雪旺细胞

用途：（免疫荧光鉴定）

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞详述

雪旺细胞沿神经元的突起分布，包裹在神经纤维上，雪旺细胞的外表面有基膜，能分泌神经营养因子，促进受损的神经元的存活及其轴突的再生，参与周围神经系统中神经纤维的构成。研究表明，神经元延伸时对与其接触的底物是非常具有选择性的，而且一旦与雪旺细胞接触，神经纤维的延伸就会严格限制在Bungner带内。          

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。

三、细胞特性

1)组织来源于实验动物的正常坐骨神经组织。

2)细胞鉴定：S100或GFAP免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、推荐培养基

我们推荐使用原代雪旺细胞培养体系作为体外培养人雪旺细胞永生化的培养基。

名称                       体积  浓度      保存条件

原代雪旺细胞基础培养基     500ml 1×       4、避光

原代雪旺细胞培养添加剂     5ml   100×     -20、避光

胎牛血清（FBS）            50ml  终浓度10% -20、避光

双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml   100×     -20、避光

六、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核

七、培养操作步骤

1、用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2、将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3、在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4、将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5、将培养板在5% CO2水浴孵箱中37孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

八、注意事项

1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞*传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。

2、确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。

3、建议客户收到细胞后前3天,100X、200X、400X各拍3张细胞照片,记录细胞状态,便于后续和技术支持沟通交流。