HCC515 人肺腺癌细胞的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

平台编号：Bio-129603

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：HCC515

细胞名称：人肺腺癌细胞HCC515

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6；1x10^6

保存温度：37；-198

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途限制：仅供科研4类

培养体系：DMEM高糖（不含丙酮酸钠）+10S+1%三抗

培养温度：37

二氧化碳浓度：5%

简介：人肺腺癌细胞HCC515取自39岁女性供体，贴壁培养。

用途：细胞系

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37培养约2-3h。

3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。

4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

三、细胞的运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

四、细胞培养步骤

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4、收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议客户冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

下面T25瓶为类；

1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2、4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

五、注意事项

1、收到细胞后首先观察 T-25 瓶是否有损坏、漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养

3、对于贴壁细胞，若大部分细胞漂浮，置于培养箱隔夜观察，大部分漂浮细胞重新贴壁，表明细胞活力正常， 继续培养，剩余漂浮的细胞可以去掉；若大部分细胞仍然不贴壁，将漂浮的细胞离心收集，用台盼蓝染色鉴定细胞活力， 并与本公司销售人员及时联系。

4、建议客户收到细胞后前 3 天不同倍镜各拍几张细胞照片，记录细胞状态，如细胞出现问题请于一周内与本公司销售联系，以便于更好的帮您解决问题。