HT115 人结肠癌细胞的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

平台编号：Bio-133402

规格：1×10^6cells/T25培养瓶

细胞信息：HT115

细胞名称：人结肠癌细胞

产品类别：人源细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM（高糖）+10S

传代方法：1：2传代

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：无血清细胞冻存液

保存条件：95％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）  

传代方法：1:2传代  

传代情况：2~3天换液  

培养体系：温度：37；气相：空气，95%；CO2，5%  

细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  

冻存条件：完全培养基50%+40S+10%DMSO，液氮  

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

1）来源：结肠癌

2）形态：上皮细胞样

3）含量：>1x106 个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

三、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

四、细胞收到后的处理方法

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）  

五、细胞培养步骤

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  

1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：  

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。  

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。  

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90S+10%DMSO  

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。  

六、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。