大鼠胰岛素瘤细胞收到后的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

大鼠胰岛素瘤细胞分离自大鼠胰岛素瘤组织是指从机体的组织或器官经胰蛋白酶、胶原酶、中性蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体环境培养的细胞。

二、产品信息

平台编号：Bio-133175

规格：1×10^6cells/T25培养瓶

细胞信息：RIN-14B

细胞名称：大鼠胰岛素瘤细胞

产品类别：大鼠细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：1640+10S

传代方法：1：2传代

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：无血清细胞冻存液  

传代方法：消化3-5分钟。1:2传代，3天内可长满。  

培养体系：温度：37，气相：95%空气，5%CO2  

细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。  

冻存条件：无血清细胞冻存液  

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、细胞收到后的处理方法

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）  

四、细胞培养步骤  

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  

2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  

3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  

4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。  

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：  

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。  

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。  

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

五、注意事项

1、收货时,如不能在收到细胞后及时操作处理细胞,T25及离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜,干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升华,需即刻复苏细胞;T25瓶及离心管发货的细胞收货后在37度培养箱平衡两小时以上,再开始处理细胞,平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境。

2、贴壁细胞在消化时,因为每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样,不能完全规定消化时间,以科研人员经验为准。 对于消化这步,如果对该细胞经验不多,无法准确掌控胰酶作用时间,建议可以按照下述操作:胰酶首先复温到室温后加入细胞,然后每隔30秒,即吹打下细胞,如果能够吹打散细胞,加入完全培养基终止消化,把细胞打散后,离心去除胰酶加新的培养基重悬细胞接种 ,如果30秒吹打不下,再等30秒重复操作。注意消化时间,不要过度,细胞变圆可以吹下来即可终止。

3、传代比例建议1:2-1:3,长得比较快的细胞可以1:3,比较慢的按1:2传代;传代后,建议不要使用传代前培养所使用的培养基,会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险;细胞状态不好或者生长比较慢时,可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度;细胞碎片较多、背景较脏时,贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心(900rpm,3min)能有效改善;建议不要随意更换培养基。