荧光假单胞菌的培养特征与风险提示及临床意义！

荧光假单胞菌（P.Fluorescens）是一种环境污染菌。对于人类是一种罕见的机会致病菌。荧光假单胞菌属于假单胞菌属，是化能异养型的革兰氏阴性菌，呈杆状，有鞭毛。能分泌黄绿色荧光色素发出荧光，能产生抗生素、水解酶等代谢产物，在 4-37范围内，中性环境中生长，生理生化特性显著，是作为嗜冷菌是牛奶中危害最大的微生物。

一、培养特征

荧光假单胞菌是典型的革兰氏阴性菌，电镜观察其菌体呈杆状，对数生长期时大小一般为（0.7～0.8）μm×（2.3～2.8）μm，呈单个或成对排列，具有极生鞭毛，偶见无鞭毛无动力的菌株，运动活泼，不形成芽孢。DNA的G+C比例范围为59.4～61.3克分子％，生物型IV有最低值，生物型II有最高值。该菌能液化明胶，葡萄糖发酵、蔗糖发酵、乳糖发酵均为阳性，并且能以多种醇类物质作为碳源，不能利用乙醇、L－鼠李糖等。甲基红试验、柠檬酸盐发酵、接触酶反应均为阳性，水解淀粉、脂酶反应阴性，对青霉素有抗性，不产生绿脓菌素。

具有分解纤维素、蛋白质和结合Fe3+的能力，但不能分解几丁质。有些菌株（生物型II，III和IV）能进行反硝化，生物型I和III在卵黄反应中为阳性，生物型I一般可分解脂肪，生物型II不解脂。营专性好氧生活，可在pH5.7和7％NaCl的环境中生长，最适生长温度约25～30。大多数菌株在4或4以下生长，在41不生长。

荧光假单胞菌在KMB固体培养基上于28下培养2d后，生长良好，菌落微隆起，砖红色，边缘呈波浪花纹向外扩展，表面较湿润稍凸起不透明，易用接种针挑起，与该菌属下其他种类的典型区别在于能产生水溶性的黄绿色素（青脓素），紫外线（366nm）斜光照射下可见黄绿色荧光。荧光假单胞菌在普通培养基、麦康凯、沙门和志贺菌属琼脂培养基平板上均可生长。在PDA培养基上长势极弱或不生长，菌落深红色。

微生物的良好生长需要培养基各组分浓度和比例合适，碳源和氮源对菌体的生长或蛋白的表达影响较大，浓度太低会造成营养缺乏，限制菌体正常生长，进而影响代谢产物的产量。国内外一些学者对荧光假单胞菌的最佳生长条件做了研究，对一些促生菌和生防菌的最适培养条件进行了测定和分析，为菌株的最佳发酵条件和生态适应性评价提供了依据。

二、风险提示

荧光假单胞菌除了可以防治植物的病害之外，本身还是一种环境污染菌。在日常生活中，荧光假单胞菌是奶类、蛋类在低温保存条件下导致腐败变质的主要细菌之一。荧光假单胞菌对于人类是一种罕见的机会致病菌。在临床上最多见的是血液及血制品被荧光假单胞菌污染，当病人输入了被荧光假单胞菌污染的血液及血制品后，可出现败血症、感染性休克和血管内凝血等严重后果。

由于现有的许多抗生素对荧光假单胞菌都不敏感，所以一旦感染此菌，病死率很高。荧光假单胞菌还可以使一些动物体发生病变，产生相应的症状。在植物体中，荧光假单胞菌可以协同一些病虫害加重对植物体的危害，如研究发现，松材线虫在结合有毒的荧光假单胞菌时，能够促进黑松的致病率。荧光假单胞菌对动植物的危害受到外部环境的影响，越有利于荧光假单胞菌生长的环境就对动植物的危害越大。

随着接种冰核细菌的浓度增加，烟株的冻害程度逐渐加剧。假单胞菌属中除了荧光假单胞菌之外，其他的假单胞菌也能造成环境的污染。研究发现宁波沿海陆源排污口中存在较多的假单胞菌属，假单胞菌属的含量与排污口的主要污染物有关，氨氮含量较高的排污口假单胞菌属的含量更高。还推测与季节性温度变化有关。

三、生物学作用

以原核生物16S保守序列设计引物，用PCR方法，从荧光假单胞菌基因组中扩取其16S保守序列，连接到T-载体，以设计好的限制性内切酶，分别切割表达载体（pET32a、pMAL-c2、pGEX-6p-1 ）和目的基因，然后将目的基因与表达载体连接，转化大肠杆菌表达宿主菌（BL21、Origami），并以酶切方法验证连接的正确性；诱导表达后即可得到LPL（脂蛋白脂肪酶）

荧光假单胞菌 (Pseudomonas fluorescens)

分类学上属于细菌域、变形菌门、γ-变形菌纲、假单胞菌目、假单胞菌科的假单胞菌属。细胞为直的杆菌，大小为0.7-0.8X2.3-2.8 微米，不产芽孢，革兰氏染色阴性。有数根极生鞭毛，运动。需氧,进行严格的呼吸型代谢,以氧为最终电子受体。能以硝酸盐为替代的电子受体进行厌氧呼吸。化能营养异养，不需要有机生长因子。氧化酶阳性，接触酶阳性。能利用葡萄糖和果糖，有些菌株能从蔗糖合成果聚糖，明胶液化。生长温度范围 4-37，最适生长温度是25-30。 DNA中G+C 含量是60-61%。广泛分布于自然界，如土壤、水、植物及动物活动环境中。该菌生化能力活跃，可降解许多人工合成化合物，常被用于环境保护。

还是一种重要的植物根际促生细菌,是已知植物根际有益微生物中种群数量较多的细菌种类之一。该菌营养需要相对简单,能够利用根系分泌物中大部分营养迅速在植物根围定殖。其中一些菌株具有促进植物生长和防治病害的作用,因而可能用于植物病害的生物防治。

四、临床意义

可从伤口、痰、胸水、尿和血液中分离出来，也可从血库存在中分离出。可在冰箱储存的血液及血液制品中繁殖，而且自溶后释放内毒素。其内毒素的磷脂部分，可导致输血后不可逆的休克。

五、相关污染事例

【北京工商局称“发光猪肉”为细菌引起】北京市工商局13日回应称，北京市食品安全监控中心对送检“发光猪肉”样本进行了检测，送检样本均未检出荧光增白物质，但检出了荧光假单胞菌。专家表示，这种细菌并不可怕，对正常人群不具有致病性，只要猪肉本身没有腐败变质，煮熟即可杀灭该细菌。