小鼠膀胱上皮细胞接受后的处理方法与培养操作规程！

上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。

一、产品信息

平台编号：Bio-73813

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

细胞名称：小鼠膀胱上皮细胞

培养条件：原代细胞取组织现分

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞详述

膀胱是一个储尿器官,它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。

膀胱壁分为三层：即浆膜层、肌肉层和粘膜层。膀胱上皮细胞主要出于粘膜层，是极薄的一层移行上皮组织，和输尿管及尿道粘膜彼此连贯。粘膜在三角区由于紧密地和下层肌肉连合，所以非常光滑，但在其他区域则具有显著的皱襞，在膀胱充盈时，皱襞即消失。粘膜层有腺组织，特别是在膀胱颈部及三角区。

由于尿路移形上皮会脱落，随尿液一起排出，因此获取相对比较容易，是泌尿组织工程的种子细胞

三、细胞特性

1)细胞来源于人正常膀胱组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核

六、接受后处理

1)收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37培养约2-3h。

3)弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

七、培养操作

1)复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37水浴中迅速摇晃解冻,加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为类;

1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

八、注意事项

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5.客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务我们随时给予解答。