加载中…
个人资料
  • 博客等级:
  • 博客积分:
  • 博客访问:
  • 关注人气:
  • 获赠金笔:0支
  • 赠出金笔:0支
  • 荣誉徽章:
正文 字体大小:

HDF-A人皮肤成纤维细胞的处理与培养操作规程!

(2023-03-04 21:05:45)
标签:

技术

方法

收藏

分类: 细胞

      HDF-A人皮肤成纤维细胞的处理与培养操作规程!

 

 

一、细胞简介

人皮肤成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形,中央有卵圆形核,胞质突起,生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外,凡由中胚层间充质起源的组织,如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。另外,凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等,其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。电镜下,其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞,胞体变小,呈长梭形,粗面内质网和高尔基复合体均不发达。它具有较强的分裂增殖能力,适应性强,是*容易培养的动物细胞类型之一。

人皮肤成纤维细胞摄取所需的氨基酸,如脯氨酸和赖氨酸等,在粗面内质网的核蛋白体上合成前α多肽链,多肽链输送到高尔基复合体后,组成前胶原分子。前胶原分子由分泌囊泡带到细胞表面,然后通过胞吐作用释放到细胞外。在前胶原肽酶催化下,将每一前α多肽链的尾段除去,成为原胶原分子。许多原胶原分子成行平行排列,结合成具有周期性横纹的胶原原纤维。由胶原原纤维互相结合形成胶原纤维。

 

二、产品信息

平台编号:Bio-132163

规格:1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息:HDF-A

中文名称:人皮肤成纤维细胞

细胞数量:1*10^6

组织来源:人,皮肤

形态特征:成纤维细胞

生长方式:贴壁生长

背景描述:该细胞系为国内建系

培养条件:1640,10S,丙酮酸钠;空气95%,二氧化碳5%;37培养

换液频率:2-3天

传代比例:1:2-1:3

冻存液配方:90%完全培养基,10%DMSO

安全性:BSL-1

供应限制:仅供科研

运输方式:常温运输(T25培养瓶)

用途:STR鉴定正确

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)

 

三、细胞特性

1)细胞来源于手术切除的正常包皮组织。

2)细胞鉴定:纤维连接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式:成纤维样细胞,贴壁培养。

 

四、细胞接受后的处理方法

1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25 瓶置于37培养约2-3h。

3)弃去T25 瓶中的培养基,添加6ml 附带的完全培养基。

4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml 附带的完全培养基。

5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

 

五、培养操作规程,供参考

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备DMEM 培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),85%;北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,货号16000-044),15%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL 细胞悬液的冻存管迅速放入37水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL 培养基的15ml 离心管中混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,加入1mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml 培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3 步骤进行,最后的重悬液使用血清。加DMSO 至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀,按每1ml 的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。

 

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2、加2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml 此细胞的培养基终止消化。

3、轻轻吹打后吸出,移入15ml 离心管中,在1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,加入1mL 培养液后吹匀。

4、移入到事先准备好的含有5ml 培养基的T-25 培养瓶中或含有14ml 培养基的T-75 培养瓶中培养。

 

六、注意事项

1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5、客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术售后服务我们随时给予解答。

 

0

阅读 收藏 喜欢 打印举报/Report
  

新浪BLOG意见反馈留言板 欢迎批评指正

新浪简介 | About Sina | 广告服务 | 联系我们 | 招聘信息 | 网站律师 | SINA English | 产品答疑

新浪公司 版权所有