绿色魏斯氏菌的培养方法与使用范围及注意事项！

绿色魏斯氏菌是Weissella属的微生物，原产地为中国。是肉类加工工业中最重要的魏斯氏菌(Weissella)种类。主要用途为研究，具体用途为生物活性微生物/抗菌活性微生物。

一、菌种简介

平台编号：Bio-00076

规格：甘油/培养物

拉丁属名：Weissella Viridescens

中文译名：绿色魏斯氏菌

拉丁学名：Weissella viridescens

原始编号：JCM 1174

菌株来源：←中国科学院微生物研究所←日本

保藏人：周培瑾

直接来源国家：日本

保藏时间：2/22/2000

其他保藏编号：=ATCC 12706 =BCRC 11650 =CCUG 30502 =CIP 102810 =DSM 20410 =KCTC 3504 =LMG 3507

生物危害：四类

模式菌株：模式菌株

菌株用途：模式菌株；assay of thiamine (vitamin B1)

培养温度：37

培养基：0006    

分离源：熏肉制品

提供形式：冻干物

用途：模式菌株；硫胺素检测(维生素B1)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。

二、培养基

MRS 培养基

酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克

酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克

乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克

吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克

七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克

碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克

蒸馏水 1.0 升 PH 6.8

如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂

三、形态特征

与模式菌株Weissella viridescens NRIC 1536(T) AB023236的相似性为100%；在MRS培养基上25°C条件下培养5天，菌落呈圆形，乳白色不透明，表面光滑湿润，边缘规则，无晕环，微凸，直径1-2mm;对嗜水气单胞、致病性坎贝氏弧菌具有一定的抑制作用,对它们的抑菌圈直径分别为8mm,19mm（打孔法，孔径约5mm，48小时发酵液）；在25MA培养基上生长6天,蛋白酶、淀粉酶、脂酶（三丁酸甘油酯）、纤维素酶、木聚糖酶(产黑)阴性。

四、主要价值

主要用途为研究，具体用途为生物活性微生物/抗菌活性微生物。

五、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

六、使用范围

（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。

（2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。

（3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

七、注意事项

1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；

2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；

10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。