酿脓链球菌的形态特征与培养条件及安全须知！

酿脓链球菌（ Streptococcus pyogenes ），即 A 群链球菌（ Group A streptococcus, GAS ），为 β 溶血、对杆菌肽敏感、 PYR 阳性，具有兰氏 A 群抗原。

一、细菌简介

酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes），即 A 群链球菌（ Group A streptococcus,GAS），为 β 溶血、对杆菌肽敏感、 PYR 阳性，具有兰氏 A 群抗原，在血平板上形成大菌落，是人体的重要致病菌之一，可以引起很多种疾病，因此早期 GAS 还被称为丹毒链球菌（Streptococcus erysipelatos）和猩红热链球菌（Streptococcus scarlatinae）等。酿脓链球菌属链球菌科（ Streptoccaceae ）、链球菌属（ Streptococcus ）。

二、细菌分类

链球菌属细菌种类繁多，其传统的分类方法主要有以下两种：

1、根据血平板上菌落的溶血现象可以分为三种， 甲型溶血性链球菌( α-Hemolytic streptococcus) ：菌落周围有 1mm~ 2mm 的溶血环，呈草绿色，称甲型溶血或 α 溶血。甲型溶血性链球菌可分为草绿色链球菌（Streptococcus viridans）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）。草绿色链球菌常常寄生在口腔、胃肠道、女性生殖道，为人体的正常菌群。肺炎链球菌亦称肺炎球菌（ Pneumococcus ），是肺炎的重要致病菌，还可引起中耳炎或脑膜炎，最早被称为肺炎双球菌，由于在液体培养基中形成长链，后来更名为肺炎链球菌。乙型溶血性链球菌( β-Hemolytic streptococcus) ：菌落周围有 2mm~ 4mm 界限分明、完全透明的溶血环，称乙型溶血或 β 溶血，乙型溶血性链球菌致病力强，能引起很多种疾病， 丙型链球菌 ( γ-Streptococcus) ：菌落周围无溶血环，一般不致病，为口腔，鼻腔及肠道的正常菌群；

2、又根据表面群特异性多糖抗原（兰氏血清学试验），链球菌分为 A 、 B 、 C 、 F 、 G 等 18 个群，其中引起人类感染的 90% 链球菌属于 A 群，而 A 群链球菌大部分是乙型溶血性链球菌，因此还被称为溶血性链球菌（Streptococcus hemolyticus）。另外， A 、 C 、 G 群 β 溶血性链球菌可分为两组：大菌落组（直径大于 0.5mm ）和小菌落组（直径小于 0.5mm ）。形成大菌落的 A 、 C 、 G 群化脓性链球菌，具有多种有效的致病机制。而形成小菌落的具有兰氏 A 、 C 、 G 群抗原的 β 溶血性链球菌，在遗传上与化脓性菌株不同，属于咽峡炎群（ Anginosus group ）或米勒链球菌群 (Streptococcus millerigroup) ，目前该菌群包括咽峡炎链球菌，星座链球菌和中间链球菌。该群链球菌具有不同的兰氏抗原，是口腔和生殖道正常菌群的组成部分，有可能参与感染的形成（主要是脓肿），也有可能作为共生菌被分离。

三、基因组特征

GAS 目前已有 13 个全基因组序列，以 M1 型菌株（ SF370 ）为例，其基因组大小为 1 ， 852 ， 442 个碱基对， G + C 含量为 38.5% ，是革兰氏阳性菌中属 G + C% 较低家族中的一员。基因组中共预测了 1 ， 752 个 ORF ，其中有 1 ， 282 个（ 83% ）与其他菌种已有的假想蛋白或同源蛋白相匹配，这些菌种包括枯草杆菌、乳酸乳球菌及其他链球菌。共有 79 个稳定的RNA基因，其中包括 6 个 rRNA操纵子。另外，将近 10% 的 ORF （ 176 个）与前噬菌体（ prophage ）或转座子基因有关，前噬菌体基因组共有四个，分别携带及编码不同的毒力基因如链球菌致热外毒素（SPE, streptococcal pyrogenic exotoxins ）。这些毒力基因一般位于噬菌体基因组的末端即整合位点附近，而且 G+C 含量在 26%~30% 之间，明显低于临近的噬菌体其他基因或整个染色体的平均 G+C% （ 38.5% ），说明这些基因可能是从其他菌获得 , 另外某些链球菌致热外毒素还与金黄色葡萄球菌的肠毒素具有同源性，但是这些基因的具体来源目前尚不清楚。 GAS 基因组中普遍存在的前噬菌体基因组可以使毒力基因水平转移，这种转移不仅可以产生高致病性菌株，而且对 GAS 的进化也具有非常重要的促进作用。

四、安全须知

根据卫生部颁发的《人间传染的病原微生物名录》， GAS 属于危害程度分类第三类细菌，大量的活菌操作及样本检测包括病原体分离纯化、药敏试验、生化鉴定、免疫学试验、PCR 核酸提取、显微镜观察等操作须在生物安全二级实验室进行。对于非感染性材料的操作可在生物安全一级实验室进行。

五、培养条件

GAS 为需氧或兼性厌氧。营养要求较高，常规用培养基为含 5 %脱纤维羊血的 TSA 培养基（ Tryptic SoyAgar， Difco 公司 ）或哥伦比亚琼脂培养基。初代培养需要 5%CO2的环境 , 因为富含 CO 2 的空气可促进许多链球菌的生长及溶血性，最适温度 35 ~ 37 ，最适 pH 7.4~7.6 。在液体培养基中为絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上，经 37 培养 24 小时后可形成灰白色、表面光滑、圆形、凸起、边缘整齐、直径为 0.5mm ～ 0.75mm 的细小菌落，少数菌落表面可呈干涩，菌落周围形成透明的溶血环。虽然有文献报道厌氧条件和选择性培养基（添加磺胺甲基异噁唑）可以提高 GAS 的检出率，但目前尚未得到公认。

影响 GAS 检出率的另一重要因素是培养时间，对标本进行分离培养时，首次培养 18~24 小时即可检出 GAS ，如果观察结果为阴性，应再培养 24 小时后重新观察，可明显提高 GAS 的检出率。

液体培养基包括 TSB 肉汤（ Tryptic Soy Broth ）和 THB 肉汤（ Todd-Hewitt Broth ）或 BHI 肉汤，可从 Difco 公司购买，也可自行配制葡萄糖磷酸缓冲液肉汤，其中 THB 肉汤特别用于血清分型的 GAS 培养。

六、形态学特征

链球菌镜下呈球形或卵圆形，直径约 0.5~1.0μm ，呈链状排列，链长短不一，在液体培养基中易形成长链。无芽孢，无鞭毛。多数菌株在培养早期（ 2~4 小时）形成透明质酸荚膜。链球菌易被普通的碱性染料着色，自病灶新分离株为革兰染色阳性，老龄菌或被吞噬后的细菌可转成革兰阴性。