TF-1（人血液白血病细胞）的培养与传代方法！

一、细胞简介

平台编号：Bio-73173

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：TF-1

细胞名称：TF-1（人血液白血病细胞）

种属：人

年龄（性别）：男；35岁

生长特性：半悬浮

细胞形态：淋巴母细胞样

背景描述：TF-1细胞是由Kitamura·T等人于1987年建立，源于一名35岁日本男性的肝素化骨髓抽取样本，该患者具有严重的全血细胞减少症。TF-1细胞生长完全依赖于IL-3或GM-CSF，对IL-5无反应。多种淋巴因子和细胞因子对TF-1细胞都有作用，如：IL-1、IL-4、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、CSF、LIF、NGF。TF-1细胞不表达血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由TF-1细胞的形态和细胞化学特征及珠蛋白基因的组成性表达，显示TF-1细胞属于红系。

生长培养基：RPMI-1640＋2ng/ml rhGM-CSF＋10% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

运输方式：复苏细胞常温运输/冻存细胞干冰运输

二、TF-1（人血液白血病细胞）收到后处理

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

三、TF-1（人血液白血病细胞）培养方法

1、取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。

2、用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用弯头眼科镊取出脾脏，置于无菌培养皿中。

3、用生理盐水将取出的脾脏清洗多次，并剔除多余无用的组织。

4、将筛网置于平皿中，脾脏置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。

5、将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。

6、加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。

7、将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。

四、TF-1（人血液白血病细胞）传代方法

1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2、待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3、传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

五、TF-1（人血液白血病细胞）注意事项

1、该细胞对血清质量要求高，推荐使用HAKATA优等胎牛血清。

2、该细胞生长时需要2-5ng/ml 的人GM-CSF，且建议每2-3天补充新鲜的GM-CSF。

3、该细胞生长时，最高密度不能超过 7 X 105 cells/mL. 传代时可以 2 X 104 cells/mL的密度进行传代。

4、细胞会细胞脱落大量的细胞质颗粒，这些颗粒在培养物中积聚，不要与细菌混淆。