两歧双歧杆菌的培养方法与实验内容！

一、菌种简介

平台编号：Bio-67130

提供形式：冻干物

拉丁属名：Bifidobacterium Bifidum

中文名称：两歧双歧杆菌

拉丁名称：Bifidobacterium bifidum

其它保藏中心编号：=ATCC 29521

来源历史：←美国ATCC

收藏时间：1995-00-00

资源归类编码：15131527101

模式菌株：模式菌株

主要用途：研究；生产

特征特性：厌氧。

具体用途：《GB 4789.34-2012双歧杆菌的鉴定》阳性对照菌株。

生物危害程度：四类

培养基编号：CM0233

培养基名称：双歧杆菌培养基

培养基成分：大豆蛋白胨 5.0g，胰蛋白胨 5.0g，酵母粉 10.0g，葡萄糖 10.0g，盐溶液 40.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g(培养基煮沸后加入)，0.1%刃天青 1.0ml，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。以上液体培养基在接种前煮沸驱氧后接种，于厌氧罐中培养。[注] 盐溶液配方：CaCl2 0.2g，MgSO4 7H2O 0.48g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，NaHCO3 10.0g，NaCl 2.0g，混合CaCl2和MgSO4在300ml蒸馏水中直至溶解，加500ml蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌至全部溶解，加200ml蒸馏水混匀，保存于4下备用。

培养温度：37

需氧类型：厌氧

保存方法：真空冷冻干燥法

用途：《GB 4789.34-2/12双歧杆菌的鉴定》阳性对照菌株。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

储存条件：冻干菌种和试管斜面请置于 2-8冷藏。西林瓶菌种请置于-20冷冻。

二、培养条件

1、培养基编号：CM0233

2、培养基成分：大豆蛋白胨 5.0g，胰蛋白胨 5.0g，酵母粉 10.0g，葡萄糖 10.0g，盐溶液40.0ml，L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g(培养基煮沸后加入)，0.1%刃天青 1.0ml，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。以上液体培养基在接种前煮沸驱氧后接种，于厌氧罐中培养。[注] 盐溶液配方：CaCl2 0.2g，MgSO4 7H2O 0.48g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，NaHCO3 10.0g，NaCl 2.0g，混合 CaCl2 和 MgSO4 在 300ml 蒸馏水中直至溶解，加 500ml 蒸馏水，边搅拌边缓慢加入其他盐类，继续搅拌至全部溶解，加 200ml 蒸馏水混匀，保存于 4下备用。

3、需氧类型：厌氧

4、培养温度：37

三、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

四、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系菌种。

五、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 适宜的液体培养基（液体培养基去掉琼脂即可），滴入安瓿管内，使冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4-5ml 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。

4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。

5、暂不启开的安瓿管应于 4中保藏（特殊除外）。

6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。

7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。