短乳杆菌的培养与保存方法及实验内容！

短乳杆菌（拉丁学名：Lactobacillus brevis）为乳杆菌目、乳杆菌科、短乳杆菌属，本菌株分离自牛奶、酸乳酒、干酪、酸泡菜等物。

一、菌种简介

平台编号：Bio-67750

规格：冻干物

拉丁属名：Lactobacillus Brevis

菌株名称：短乳杆菌

其他编号：CICC 6239

培养基编号：58

培养温度：37

培养时间：48 小时

用途：用于生产泡菜，产乳酸，产风味物质较好

分离源：泡菜

培养基信息

培养基编号：58

名称：MRS培养基

备注：酷蛋白胨 10.0克 牛肉浸取物 10.0克 酵母提取液 5.0克 葡萄糖 5.0克 乙酸钠 5.0克 柠檬酸二胺 2.0克 吐温80 1.0克 磷酸氢二钾 2.0克 七水硫酸镁 0.2克 七水硫酸锰 0.05克 碳酸钙 20.0克 琼脂 20.0克 蒸馏水 1.0升 pH6.8。

用途：用于生产泡菜，产乳酸，产风味物质较好

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。

二、培养基

MRS 培养基

酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克

酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克

乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克

吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克

七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克

碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克

蒸馏水 1.0 升 PH 6.8

如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

四、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅胶保存法；磁珠保存法；麸皮保存法；纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

低温冰箱保存法(-20、-50或-85)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

干冰保存法(-70左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

液氮保存法(-196)：是适用范围最广的微生物保存法。

六、注意事项

1）乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养首次活化，冻干物一经打开，必须用完，不能预留。干粉用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；

2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年

5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。