原代细胞正常人羊膜细胞（HAM）的培养方法！

实验材料

1、人胎盘；

2、A/GA：含抗生素的A（庆大霉素，50μg/ml；两性霉素B，1.25μg/ml；链霉素100μg/ml；青霉素100U/ml）；

3、丙三醇；

4、含50%丙三醇的DMEM；

5、胰蛋白酶/EDTA；

6、Millicell微孔膜组织培养插片；

7、塑料刮片和无菌棉拭子；

实验方法

1、用A/GA清洗组织；

2、分离人羊膜，用戴手套的手从胎盘上将羊膜钝性分离下来，分离出的羊膜薄层包括上皮细胞，基底膜和一些基质组织；

3、用无菌棉拭子除去基底膜下的基质组织，使分离的羊膜尽可能的薄；

4、在监测供者血清以除外疾病的时期，可以将粗分离出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中，-70存放；

5、临用前解冻人羊膜，用A清洗后将其切成直径约为2mm的小块；

6、用胰蛋白酶/EDTA消化组织块，37，30min；

7、用塑料刮片轻刮消化过的人羊膜，除去上皮细胞，注意不要破坏基底膜；

8、用A清洗裸露的羊膜，并将它的基底膜面（去除上皮细胞的面）黏附在Millicell微孔膜组织培养插片上。

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