人神经母细胞瘤细胞的运输和保存及培养方法！

人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)是1970 年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH 细胞系经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。SH-SY5Y 细胞的饱和密度大于1X106 细胞/cm2。

一、细胞简介

平台编号：Bio-73149

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：SH-SY5Y

细胞名称：SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）

细胞用途：仅供科研使用。

种属：人

年龄（性别）：女；4岁

组织来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓

生长特性：贴壁/悬浮

细胞形态：上皮细胞样

细胞特点：该细胞的密度可高达1×106 cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羟化酶的活性。

背景描述：SH-SY5Y细胞是于1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。SH-SY5Y细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性，SH-SY5Y细胞的饱和密度大于1×10^6/cm^2。

生长培养基：MEM/F12＋15% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

1）来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓

2）形态：上皮细胞样

3）含量：>1x106 个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

三、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

四、人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备MEM 及F-12 培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，45%；F-12(F-12：GIBCO,货号11765-054)，45%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO 后进行冻存。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2、加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

五、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。