卵形拟杆菌的保藏方法及优缺点分析！

卵形拟杆菌，Bacteroidesthetaiotaomicron多形拟杆菌 。多形拟杆菌对肥胖大鼠减肥影响的初步研究及毒性实验。多形拟杆菌的基因组特点证明其是一种重要的糖化菌。多形拟杆菌对营养物质的利用主要表现在2个方面：一是降解难被宿主消化的营养物质；二是通过影响宿主的代谢机制,使营养物质被宿主更高效率的吸收和利用。

一、菌种简介

平台编号：Bio-110964

规格：冻干粉

拉丁属名：Bacteroides Ovatus

中文名称：卵形拟杆菌

拉丁名称：Bacteroides ovatus

来源历史：ATCC

收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0

原始编号：A. H. Eggerth

模式菌株：是

生物安全级别：二级

其它保藏中心编号：ATCC 8483=NCTC 11153

培养基编号： 177

培养温度：37

培养时间：24-48h

需氧类型：专性厌氧

分离基物：人类粪便

保存方法：冷冻干燥管保藏

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、培养基

血平板培养基（TSA+5%脱纤维蛋白羊血）

三、保藏条件

斜面和冻干菌种应在 2-8°C 保存。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。

四、注意事项

1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；

2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8） 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

五、卵形拟杆菌的保藏方法及优缺点分析

目前有很多保藏方法可以适用于真菌的保藏，但大体来可以分为三类：一是让真菌连续生长的保藏工艺。这一类的保藏工艺的特点是不断的将菌株移植在新鲜的培养基上，并在合适的条件下生长，随后置于一个低温的环境中，一般是4-10，这类保藏工艺主要包括斜面移植、油管保藏和蒸馏水保藏法等。二是利用干燥环境保藏菌株的休眠体，如分生孢子、厚垣孢子等，干燥选用的基质可以是空气、硅胶、土壤、沙子等。三是利用抑制菌株代谢活性的办法达到长期保藏，一般是通过脱水降低细胞内水分或低温冷冻，在此过程中关键环节是避免和降低冰晶对细胞造成的伤害，这类保藏工艺包括冷冻干燥法、低温冻结和液氮保藏法等。Ryan和Smith对各种保藏方法进行了优劣比较。

大多数真菌资源研究利用基本上是以得到纯的培养物为前提，而真菌在培养的过程中，必然离开原来的生长环境，营养、环境条件发生改变，这是真菌发生性状改变的重要因子，真菌培养物长期保藏就会不可避免的发生性状变化。难以培养的真菌以及一些专性寄生真菌不能在人工培养基上培养生长，其主要原因是在目前认知条件下，不能够提供此类微生物生长所需的必要条件。此外，丝状真菌保藏一般采用保藏真菌的孢子、菌丝，其中保藏真菌的孢子一般周期较长，活性较为稳定，但无论在无性阶段产生分生孢子还是有性阶段产生的性孢子，都是经过基因重组阶段，这就增加了保藏菌株发生变异的可能性。真菌在分离、培养、保藏的工艺处理、长期保藏、保藏后复活等环节上，都有可能造成真菌细胞发生损坏或基因组信息缺失，从而引起性状发生变化。

六、卵形拟杆菌单层安瓿瓶菌种培养及打管说明

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4中保藏。