耻垢分枝杆菌的特点与培养及注意事项！

一、菌种简介

平台编号：Bio-03098

规格：冻干物

拉丁属名：Mycobacterium Smegmatis

中文译名：耻垢分枝杆菌

拉丁学名：Mycobacterium smegmatis

原始编号：NRRL B-692

菌株来源：←中国科学院微生物研究所

直接来源国家：美国

保藏时间：5/22/1967

其他保藏编号：=ATCC 607

生物危害：三类

模式菌株：非模式菌株

菌株用途：无毒菌株

培养温度：37

培养时间：24-48 小时

培养基：0002    

提供形式：冻干物

用途：无毒菌株

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、菌株特点

1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。

2、适生长繁殖湿度为56－65，培养24h即可形成菌落，37下24h看不到菌落。

3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105－5×106cfu/片或1×106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121，3.9 min阳性，19 min阴性；D10值1.3－1.9 min，符合美国药典第十一版规定标准。

4、该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4下保存一年抗力无明显下降，在常温（20左右）可保存1个月。

三、培养基

*脑心浸液琼脂培养基（BHI）

蛋白胨 10g 葡萄糖 2g NaCL 5g NaH2PO4 2.5g

柠檬酸钠 5g 脑浸汁 800ml

{注} 猪心和猪脑浸汁法：1）新鲜猪心除去心头和脂肪，搅碎 100g 加蒸馏水至 1000ml ；2）新鲜猪脑除去血管，取 200g 加蒸馏水至 1000ml；3）50保温 1 小时，然后煮开 15 分钟；4）冷却后用纱布过滤备用。

四、保藏条件

斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存；西林瓶菌种请置于-20冷冻。

五、培养条件

1、营养肉汁琼脂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121，15min。

2、需氧类型：好氧

3、培养温度：55

六、注意事项

1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板,或者直接接种液体培养基以不超过5ml 为宜）；

2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。